Узнать комплектацию: Проверка комплектации🛂 автомобиля по VIN коду или гос номеру — Автокод — Запчасти Владивосток | Автозапчасти Владивосток

Содержание

Как узнать комплектацию автомобиля по VIN бесплатно

Все автомобили имеют уникальный код, или VIN-номер. Номер этот используется часто, и каждый владелец авто знает о его наличии.

Но мало кому известно, как узнать комплектацию автомобиля по VIN бесплатно и какие вообще сведения о машине могут быть зашифрованы в 17 символах.

Что такое ВИН-номер?

Присваивать каждому новому автомобилю уникальный номер начали давно, еще в 1980 году. В номере могут использоваться цифры от 0 до 9 и практически все буквы английского алфавита.

Не используются только несколько букв — O, Q и I, поскольку в печатном виде их можно легко перепутать с цифрами.

Какая информация содержится в ВИН-номере

Первые три цифры содержат географическую информацию.
В первую очередь это — страна производства транспортного средства. По этой причине первые цифры у большинства автомобилей внутри страны совпадают.
Особенности производства компании, выпустивший автомобиль.
Тут все зависит от конкретных особенностей и самой фирмы. К примеру, для небольших по размеру производств, выпускающих мелкосерийные партии моделей до 500 штук, третьим символов в номере должна быть цифра «9».
На девятом месте по счету в ряде случаев ставится контрольная цифра, при помощи которой можно определить, не был ли каким-то образом VIN-номер автомобиля изменен.
В зависимости от суммы цифр и некоторых других значений эту информацию можно проверить.
Другие цифры содержат, в том числе, информацию о годе выпуска машины и некоторые ее технические характеристики.
Именно этот момент важен для автомобилистов больше всего, так как при помощи этих цифр может быть проверена комплектация авто по вин коду.

Контрольную цифру принято использовать только у производителей из США и Китая, а вот японские марки и автомобильные компании из Европы подобную практику отвергают.
У таких машин на девятом месте стоит либо случайная цифра, либо она означает другую дополнительную информацию про авто.

Какую полезную информацию содержит VIN-номер

На данный момент комплектация авто по вин коду бесплатно может быть проверена в различных местах: на сайтах и сервисах в сети интернет, предлагающих проверку на бесплатной основе. Однако сначала следует уточнить, какую именно информацию там можно найти.

Информация, которую можно узнать:

Точная дата выпуска автомобиля.
Название марки и модели машины, а также модельный ряд.
Тип кузова — седан, универсал, хэтчбек и далее по списку.
Тип двигателя, его мощность и объем.
Версия автомобиля (серия производства).
Тип привода: передний, задний, полный.
Тип трансмиссии и количество передач.
Токсичность выхлопа в соответствии с международными нормами (4, 5 класс токсичности).
Система кондиционирования воздуха (кондиционер или климат контроль, однозонный или двухзонный).
Страна, для которой выпускался автомобиль (в виде буквенного кода, к примеру «RU»).
Цвет и тип покраски машины снаружи, а также тип обивки салона.

Зачем это нужно

Как видно, полезной информации можно получить достаточно много. При покупке автомобиля с рук, к примеру, такая проверка позволяет узнать, действительно ли владелец продает то, что было произведено, либо машина претерпела существенные изменения или вообще не соответствует заявленному производителем.

В таком случае от покупки лучше или вообще отказаться, или искать причины разногласий реальности с VIN-номером и проверять все вдвойне тщательно.

Комплектация авто по ВИН коду бесплатно

Возможность узнать комплектацию любой машины по ее VIN-коду предлагается на большом количестве онлайн-сервисов.

Онлайн-сервис на сайте Elcats.ru.

Шаг первый — выбираем производителя автомобиля из списка на главной странице сайта:

Шаг второй — вводим ВИН-номер машины. Сервис также предлагает еще больше уточнить область поиска, выбрав конкретную модель автомобиля, но в 99% случаев никакого смысла это не несет, информация и так отображается в полном объеме:

Шаг третий — после ввода номера появляется окно с достаточно подробными характеристиками автомобиля:

Шаг четвертый — нажимаем на ссылку «показать список опций» и получаем всю возможную информацию о комплектации машины:

Пожалуй, данный сервис лучше всех остальных отвечает на вопрос как узнать комплектацию автомобиля по VIN бесплатно. Однако, с учетом возможных ошибок и погрешностей, данные лучше сверять хотя бы из двух источников.

Онлайн-сервис vinformer.su.

После ввода ВИН-номера, данный сервис предлагает ввести капчу в целях защиты от роботов, после чего уточнить тип двигателя в проверяемом автомобиле.

Второй шаг, в прочем, можно пропустить, после чего появится таблица с достаточно подробной информацией о машине, удобно представленной по пунктам и разложенной по полочкам.

Для некоторых машин сервис по каким-то причинам показывает только часть информации, в этом случае можно попробовать воспользоваться другими бесплатными инструментами.

Более того, данный сервис предлагает только три бесплатные проверки. В прочем, редко когда бывает нужно проверить большее количество машин за раз.

Онлайн-сервис pogazam.ru.

Данный сервис позволяет сразу ввести ВИН-номер машины и узнать все основные подробности о конкретном транспортном средстве.

Однако подробная информация с точным списком опций в конкретной комплектации здесь не отображается.

Как узнать комплектацию автомобиля по vin бесплатно и с гарантией

Если нужна гарантированно точная информация о машине по её VIN-номеру, можно пойти еще двумя путями:

Узнать, предлагает ли официальный сайт производителя проверку своих машин по коду. К примеру, у автопроизводителя Kia такая функция есть и находится по адресу https://www.kia.ru/service/decoding_vin/.
Проверка на официальном сайте ГИБДД — https://www.gibdd.ru/check/auto/.

Во втором случае будет сообщена только общая информация о машине: год выпуска, тип двигателя и так далее.

Однако при этом проверяется и другая информация, которая необходима в сделках купли-продажи авто: информация о наличии машины в розыске, о старых постановках и снятии с учета, об авариях и наличии ограничений на машину.

Такой комплексной проверки будет достаточно, чтобы узнать об автомобиле практически всю его историю и характеристики, а затем сделать правильный выбор при покупке.

Как узнать комплектацию автомобиля » AutoKontact

Автор статьи: AutoKontact.ru

дата: 16.11.2020

Зачастую владельцу автомобиля требуется выяснить полные данные о комплектации своего транспортного средства. Как правило, такое бывает, если автомобиль приобретается у старого хозяина, но иногда требуется выяснить заводскую комплектацию автомобиля, который приобретался в салоне. Попробуем ответить на вопрос — как узнать комплектацию автомобиля?

Основной способ, как узнать какая комплектация у машины

Главным источником всех данных о любом транспортном средстве является vin-номер. В нём заключены данные не только о типе машины, двигателе, заводе-изготовителе и стране выпуска, но и о комплектации машины. Значит, для того, чтобы выяснить, как узнать комплектацию автомобиля, требуется найти vin-код в документации на машину или непосредственно на транспортном средстве. Необходимо обратить внимание на крайние семь цифр ВИН-кода: именно там заключается информация о комплектации транспортного средства.

Как расшифровать данные vin-кода.

Общей системы шифровки vin-комплектаций не бывает, у каждого автопроизводителя она собственная. Именно поэтому самый популярный метод, как узнать комплектацию автомобиля или как узнать опции автомобиля, узнав vin-код, – это заглянуть на официальный интернет-ресурс завода, на котором произведено авто. Как правило, на ресурсе изготовителя непременно должен присутствовать раздел VIN decoder или VIN search. Потребуется ввести в графу vin и таким образом выяснить комплектацию машины.

Есть ещё один способ, как узнать комплектацию автомобиля по vin. Этот способ заключается в обращении к заграничным сервисам CarFax или AutoCheck. Но эти сервисы небесплатные и содержат данные по транспотрным средствам, импортированным из Европы или Америки.

Похожие публикации

Как проверить комплектацию авто по VIN (ВИН) коду

Как узнать комплектацию автомобиля по VIN-коду?

Многие автолюбители не осознают, насколько важно проверить заводскую комплектацию автомобиля по ВИН-коду перед его покупкой, даже определить страну сборки. Более опытные автовладельцы однозначно ответят, что это не только поможет сделать правильный выбор, но и сэкономить при обнаружении несоответствий между изначальным оснащением, данными документации и сведениями настоящего хозяина. Также проверка убережет вас от таких неприятностей как, например, приобретение «двойника» или угнанной машины с перебитым номером.

Содержание:

Как знание комплектации помогает в разоблачении мошеннических схем?

Как правило, при подготовке дорогих криминальных автомобилей к продаже мошенники подгоняют не документы под машину, а именно авто под оригинальную документацию. При этом таблички с VIN-кодом и прочей информацией тоже применяются подлинные – они ввариваются в те места, где им положено находиться. Факт замены трудно выявить обычному покупателю транспортного средства (ТС) – тем более, если данная процедура осуществлялась профессионалом. В большинстве случаев это определяется экспертами ГИБДД при сверке кузовных номеров.

Как результат – арест машины. И это в лучшем случае, а в худшем – уголовное дело на владельца. Ведь помимо того, что ТС угнанное, оно может числиться еще и в криминальных делах – наезд со смертельным исходом, грабеж, предумышленное убийство и т.д.

А если вы удосужитесь узнать по VIN комплектацию автомобиля, всего этого можно избежать. Каким образом? Да все просто – максимально точно подогнать получится только основные параметры между документацией, ВИН-кодом и самим ТС. Заводское оснащение в мельчайших его деталях подстроить практически невозможно.

Поэтому при выявлении даже малейшего несоответствия между расшифрованной изначальной комплектацией и указанной в документации следует уделить особое внимание осмотру мест крепления табличек с VIN-кодом и кузовным номером:

Не допускается наличие сварных швов вокруг табличек и на стыках элементов кузова. Традиционно они крепятся с помощью специальных заклепок. Наличие сварного соединения – прямое доказательство наличия криминальной истории.
Сварные швы могут быть качественно зачищены и закрашены, но в любом случае следы постороннего вмешательства будут видны – например, в местах зачистки будет большая шероховатость, чем в других местах.

Если проверенная комплектация авто по ВИН-коду не соответствует заявленной и обнаружены вышеперечисленные следы постороннего, то покупать такую машину – себе дороже.

Также бывают ситуации, когда заводские агрегаты заменены неоригинальными. Это, конечно, не так страшно, как криминальная история, но может существенно затруднить вам жизнь. При обнаружении таких «нестыковок» вы можете либо отказаться от покупки такого ТС, либо снизить изначально указанную продавцом цену.

VIN-код и кузовной серийный номер: отличия

Это 2 разных номера и на большинстве современных автомобилей стоит и тот, и другой. А незнание этого чревато не только путаницей, но и лишней тратой денег – на вас могут нажиться недобросовестные полицейские, обнаружив якобы «несоответствие» по номерам и предложив «порешать проблему на месте» за определенную сумму. Поэтому давайте разберемся, чем же отличаются между собой VIN-код и кузовной номер.

ВИН-код – уникальный идентификационный номер, отвечает за все транспортное средство. А кузовной номер отвечает лишь за кузов. VIN всегда состоит и 17 символов, а кузовной – содержит 9-14 символов.

Обычно более короткий номер кузова дублируется в длинном идентификационном, но не всегда – они могут быть полностью разными. Также они отличаются и по месту расположения. Так, если размещение ВИН-кода стандартно, то кузовной серийник производитель может разместить в любом месте на свое усмотрение.

Первые 4-6 символов кузовного номера определяют марку и тип кузова, а все остальные – это серийный номер изготовителя. Сегодня преобладающее количество автопроизводителей идентификационную маркировку выполняют с помощью VIN-кода. Но существуют и исключения – некоторые японские и американские автоконцерны выпускают машины только с кузовным серийным номером.

Но сегодня целесообразнее пробивать комплектацию машины по ВИН-коду, а не по номеру кузова, который практически всегда является частью VIN, как и было указано выше.

Что именно можно определить с помощью ВИНа?

Пробить по VIN комплектацию автомобиля лучше всего еще перед его осмотром – можно просто созвониться с продавцом и уточнить идентификационный номер (скрывать эту информацию при условии отсутствия каких-либо скрытых проблем он не должен).

Определить оснащение можно несколькими способами:

Самостоятельно – самый сложный и трудоемкий метод. Собирать информацию вы сможете только после определения базовых характеристик транспортного средства. При этом вам придется найти и «перелопатить» множество информации в сети – начиная с различных онлайн-каталогов и заканчивая разными сборниками таблиц. Это может занять не один день, а результат не всегда оправдывает ожидания
Через онлайн-сервис «АвтоИстория» – наиболее простой и быстрый метод узнать по VIN комплектацию транспортного средства. Вам не придется изучать и собирать данные с разных источников, нужно просто ввести идентификационный номер и «дело в шляпе» – отчет будет сформирован в течение нескольких минут. Стоит услуга совсем недорого, что делает проверку доступной каждому. При этом кроме оснащения ТС вы узнаете максимально полную историю его эксплуатации (криминальную, банковскую, судебную, таможенную).

Проверяя оснащение авто с помощью нашего сайта, вы сможете узнать следующую информацию:

Поколение модели, начало производства и модельный год.
Характеристики двигателя – серия, тип, объем, мощность, крутящий момент.
Тип коробки передач.
Тип кузова, цвет кузова.

Пример и отчета представлен ниже:

Как пробить комплектацию через онлайн-сервис «АвтоИстория»?

Процедура проверки по VIN комплектации машины на нашем сайте предельно проста. Вам нужно выполнить всего несколько действий:

В поле ввода ввести идентификационный номер транспортного средства.
Указать рабочий электронный адрес, на который вам будет отправлена история ТС.
Оплатить услугу.

Подробный отчет придет на указанный вами E-mail в течение 5-15 минут. Когда сервис загружен, бывают задержки, но не более 1,5 часов с момента оплаты.

«АвтоИстория» работает с базами данных официальных, неофициальных и коммерческих структур. Поэтому мы гарантируем, что вы получите максимально подробную и правдивую информацию о заинтересовавшем вас автомобиле. Проверить оснащение ТС на нашем сайте вы можете без ограничений, региональных привязок и в любое удобное для вас время дня или ночи – наш режим работы 24/7.

Исходя из вышесказанного, комплектация авто по ВИН-коду должна проверяться в обязательном порядке. Этим вы значительно сократите риск возможного попадания в мошеннические схемы, сохраните свои деньги, время и нервы. «АвтоИстория» – ваш надежный помощник в вопросах покупки подержанного транспорта. Мошенники коварны – будьте всегда начеку!

Как узнать комплектацию по VIN (ВИН) коду

Продавец говорит одно, а по идее должно быть совсем другое? Просто пробейте ВИН код машины по базе и узнайте, что должно стоять с завода конкретно на этом экземпляре.

VIN код — где найти и как читать

Что такое VIN — это идентификационный номер транспортного средства (vehicle identification number). У каждого автомобиля он свой, никогда не повторяется. Хотя, конечно, некоторые символы могут совпадать, особенно когда речь идет об одной марке. Всего символов должно быть 17: цифры и латинские буквы размещены под капотом (в районе моторного щита), а также в дверном проеме водителя — на центральной стойке крыши. У автомобилей американского происхождения табличка размещается под лобовым стеклом.

Чтобы при чтении кода не возникало вопросов и ошибок, производители условились не использовать символы с двояким смыслом — буквы I, O, Q, которые легко сойдут за единицу и ноли.

Расшифровка стандартного VIN:

первый символ — страна изготовителя;
второй — код завода;
третий — тип транспорта;
с четвертого по восьмой — основные технических данные машины, включая силовой агрегат и трансмиссию, кузов, серию;
девятый символ — контрольная сумма для выявления перебитых табличек.

Что же касается остальных обозначений, то они расскажут об объеме, мощности и типе двигателя, рулевом управлении, коробке передач, варианте внутренней отделки салона, а также номере лакокрасочного покрытия.

Как пробить ВИН код

Времена, когда для получения расшифровки номера кузова требовались связи в правоохранительных органах или знакомые в автосалоне, давно прошли. Теперь в интернете есть немало открытых баз, которыми могут воспользоваться все желающие. Многие из этих каталогов предоставляют отчет абсолютно бесплатно. Правда, не все сайты универсальны в применении: часть баз содержит информацию только по определенным маркам, например Volkswagen или японские марки — Mitsubishi, Toyota, Honda и пр. Существует несколько бесплатных ресурсов для расшифровки «винов» Mercedes-Benz и BMW. К числу наиболее удобных сервисов можно причислить elcats.ru и www.ilcats.ru — здесь представлены все распространенные бренды, поиск интуитивно понятен.

Расшифровка комплектации Audi по ВИН

Главная особенность марки — структура кодов для европейского и американского рынков отличается. Машины для европейского рынка вместо символов на 4-6 позициях имеют три литеры Z, что неопытные автолюбители могут принять за знак оцинкованного кузова. На самом деле это просто заполнение пробелов, VIN транспортных средств для рынка США вместо «зеток» имеют обозначение модельной линейки, двигателя, технологий пассивной безопасности (4 — автоматизированные ремни, 5 — плюс одна подушка, 8 — две фронтальных подушки).

Особенности VIN на автомобилях Nissan

В рамках японского бренда можно отметить скрытый год выпуска, что свойственно моделям для европейского рынка. В то же время ВИН код на «американцах» обычно полностью соответствует международному стандарту. Владельцы автомобилей Nissan знают, что восьмой по счету символ кода отвечает за системы пассивной безопасности, как и в случае Audi. Но здесь используются несколько другие обозначения: A — инерционные ремни, B — с фронтальными эйрбегами. Литера J укажет на полноприводную трансмиссию. Неплохую информацию по «ниссанам» дает ресурс avtostat. com.

Читаем VIN на кузове Mercedes-Benz

Как понять, что ваш «Мерс» предназначен для европейского рынка? Об этом расскажет четвертый символ ВИН: 1 или 2 — «европеец», латинская литера (чаще всего A, B, C, D, N, R, T, U, V, Y) — для Североамериканского рынка. Также нужно помнить, что, в отличие от «американца», европейские экземпляры не позволят с ходу узнать год выпуска кузова. Для этого потребуется вбивать шифр в международную базу.

Комплектация BMW по коду кузова

Плюс «баварцев» в том, что они полностью отвечают стандарту обозначения VIN, независимо от рынка сбыта. Хотите узнать, для каких стран выпущен конкретный экземпляр — взгляните на седьмой символ, единица укажет на леворульное исполнение не для США. Праворульные машины маркируются двойкой. «Американки» — тройкой (а также буквами C или G).

Какая польза от чтения VIN

Главная сила шифра — он расскажет вам, какое оборудование было установлено на транспортное средство с самого начала. Это позволит пресечь попытки продавца убедить вас в том, что на торпеде стоит родная навигация, а вместо обычного кондиционера в машине на самом деле трехзонный круиз-контроль. Приезжай, мол, убедишься на месте. Подобные вещи нередко используются для заманивания доверчивых покупателей — используйте VIN для упрощения подбора лучших вариантов.

Еще заводской код поможет заказать недостающие аксессуары, которые были сломаны либо демонтированы прежним владельцем. А код родной краски даст возможность не бегать по магазинам с крышкой лючка топливного бака, если на приобретенной машине нужно провести небольшой кузовной ремонт.

Комплектация по ВИН-коду. Как узнать комплектацию по VIN-коду

Здравствуйте, уважаемые читатели блога Kak-kupit-auto.ru. Сегодня наша тема — это комплектация по ВИН-коду, как узнать комплектацию автомобиля по vin, как выяснить оснащение, в котором автомобиль был выпущен с завода. Узнать комплектацию по VIN коду – задача непростая, так как эта информация нигде не собрана в одном месте. Однако, мы с Вами попробуем разобраться, как узнать комплектацию автомобиля по ВИН коду.

Комплектация по ВИН

Вопрос, где находится ВИН номер на автомобиле и в документах, мы с Вами уже обсудили.

Покупая машину с пробегом, обязательно проверяйте, чтобы все VIN-коды на автомобиле, соответствовали указанному в ПТС.

Рекомендуется уточнить ВИН номер авто у продавца еще на этапе телефонного звонка, скрывать VIN-номер продавец не должен.

Итак, попробуем узнать комплектацию по ВИН.

Как узнать комплектацию автомобиля?

К сожалению, единой базы комплектаций по VIN коду НЕ существует, поэтому собирать информацию приходится из разных источников, буквально по крупицам. Мне повезло, и перед покупкой своего Ford Focus II, изучая цены запчастей в интернет-магазине Exist, я наткнулся на каталог автозапчастей Elcats.ru. Этот каталог расшифровывает комплектацию по VINу более чем подробно, он полностью расшифровывает оснащение данного конретного авто, вплоть до того, какие на нем установлены подушки безопасности, какая тормозная система, какой цвет салона и т. д.

Но, как оказалось, столь подробная расшифровка в этом каталоге действует только для автомобилей трех марок: Ford, Volkswagen и Skoda, а что касается остальных моделей, то расшифровка для них выводится весьма скудная.

Итак, узнать комплектацию по VIN для автомобилей Ford, Volkswagen и Skoda можно на портале по подбору запчастей Elcats.ru. Выбираем марку Ford, а затем …

вбиваем в соответствующее поле VIN-номер и жмем «Поиск»:

Как видите, появилась небольшая расшифровка комплектации по ВИН номеру, но это еще не все. Справа есть ссылка «Показать список опций», нажимаем на нее.

Открывается подробнейший список опций, в котором отражена полная информация по всем опциям комплектации автомобиля.

Как уже упоминалось выше, такая детальная расшифровка на этом сайте работает только для автомобилей марок Ford, Volkswagen, Skoda. Например, для Volkswagen расшифровка выглядит так:

Для других марок авто существуют похожие сервисы. Ссылки на них Вы найдете чуть ниже, они работают по тому же принципу, поэтому Вы в них без труда разберетесь самостоятельно.

Комплектация по VIN

Второй сервис, который я хотел бы Вам порекомендовать — это портал магазина автозапчастей Exist. О расшифровке ВИН в этом сервисе, читайте в отдельной статье на тему Как узнать модель двигателя по ВИН.

Теоретически, возможность узнать комплектацию по ВИНу должна быть у официальных дилеров, поэтому есть смысл обратиться к ним. Но сделать это проблематично, ведь придется поехать к дилеру, договариваться с ним, но все равно не факт, что расшифровка ему доступна и он согласится бесплатно заниматься этим вопросом. Да и хотелось бы, выяснить комплектацию через интернет, не выходя из дома.

Ниже перечислены ссылки на некоторые сервисы по расшифровке комплектации через VIN код.

Кстати, на сайте carinfo.kiev.ua, можно узнать комплектацию по ВИН для любой марки авто. По крайней мере у меня получилось расшифровать несколько ВИНов разных марок. Обязательно попробуйте, должно получиться и у Вас.

Добавлено 22 января 2019 г.
А здесь Вы можете попросить расшифровать VIN-код автомобилей концерна VAG (Volkswagen, Audi, Skoda, Seat). Надо зарегистрироваться на форуме и задать свой вопрос, а через пару дней ребята опубликуют полнейшую расшифровку. Не забудьте сказать им спасибо.

Страна сборки по ВИН-коду

Выяснить страну сборки по ВИН коду может быть довольно проблематично. Разные сервисы могут показывать разные значения, но сервис vinformer.su показывает не только страну сборки, но даже адрес производителя, поэтому я решил считать этот источник надежным ))

Однако, самый надежный способ узнать страну сборки автомобиля — это заглянуть в ПТС. На первой странице указывается организация изготовитель, страна сборки (производства) и таможня, выдавшая ПТС. Напомню, если ПТС выдан таможней — одно это уже означает, что машина была ввезена в РФ из-за границы и здесь ее не собирали. Естественно, все это надежно только если ПТС — оригинал.

А на этом все. Если Вам известны другие надежные сервисы для проверки комплектации по VIN-коду — напишите об этом в комментариях.

Как узнать комплектацию компьютера? Советы новичку

Иногда возникает потребность узнать комплектацию своего компьютера, на то может быть множество причин от банального любопытства до вопроса апгрейда оборудования. И тут возникает проблема, как же посмотреть полное наименование внутренних компонентов. В большинстве случаев этот вопрос ставит в тупик новичков, что вполне объяснимо, но как говориться: «Ни так страшен чёрт, как его малюют!»…

Содержание статьи:

Как посмотреть комплектацию компьютера?

Давайте начнём с самого простого способа, который обычно упускается из вида. Для того чтобы проверить компоненты компьютера, достаточно, посмотреть товарный чек или гарантийный талон, которые должны перечислить наименования товаров. Понимаю Ваше возмущение, что навряд ли сохранились документы такого плана, так и бывает что в течении времени такие бумаги просто теряются. Поэтому дальше рассмотрим, как узнать комплектацию путём программных средств и самой системы.

Обзор комплектации компьютера через операционную систему

Для того чтобы узнать что содержатся в вашем ПК кликнете правой кнопкой по ярлыку «Компьютер» (на рабочем столе или в меню Пуск) и выберите из контекстного меню пункт «Свойства». Перед Вами откроется окно в котором содержится минимальная информация о системе и внутренних компонентах.

Конечно, отображённой информации окном выше будет мало для опознания модели материнской платы или версии оперативной памяти, поэтому можно воспользоваться имеющимся инструментом «Диспетчер устройств ». Для того чтобы попасть в данную область, есть несколько способов, либо через свойства компьютера, которое было открыто ранее и нажать соответствующий пункт в левой панели, либо через «Панель управления».

Перед Вами откроется список всех установленных устройств на Вашем ПК. Весь каталог построен виде разделов оборудования – двойным кликом открываем один из подразделов и видем наименование.

Обзор комплектации компьютера через программы

Есть и другой способ посмотреть комплектацию вашего персонального компьютера или ноутбука, но для него нужно будет выбрать и установить одну из специальных программ.

Рекомендую попробовать разработку от компании Piriform, которая прославилась своими утилитами CCleaner и Defragler. Программа под названием Speccy, распространяется бесплатно вне коммерческих целях и доступна для скачивания с официального сайта разработчика.

После стандартной процедуры установки, запустите программу и на главном окне через несколько секунд диагностики увидите общую системную информацию.

Для того чтобы узнать более подробные сведения, скажем о жёстком диске, то кликнете соответствующий раздел, после чего информационное окно выведет инфо в текстовом формате по выбранному пункту.

Вместо послесловия

Вот таким образом можно немного ближе узнать свой компьютер. Помимо выше рассмотренной программы есть и другие варианты, которые Вы с лёгкостью найдёте на просторах Интернет. Одной из самых популярных является «AIDA64 Extreme Edition«, она даёт самую развёрнутую системную информацию по компьютеру, и даже даёт ссылки на скачивание драйверов для рассматриваемого оборудования.

Как узнать комплектацию автомобиля по вин коду

Приветствую! Бывают случаи, когда вам предлагают купить автомобиль по смешной цене. Конечно, при таком раскладе многие даже не удосуживаются узнать технические характеристики транспортного средства, едет и хорошо. Однако рано или поздно наступает момент, когда в машине что-то ломается, вот тут у рядового водителя и возникает вопрос как узнать комплектацию автомобиля по ВИН коду?

Кто не в курсе, это такой шифр из 17 символов, которым идентифицируют практически все автомобили на планете, в том числе отечественные «Жигули». Именно эти цифры и латинские буквы позволяют профессионалу за считаные минуты узнать всю интересующую информацию по конкретному транспортному средству. Но этот факт не должен вас расслаблять ведь чтобы повторить их успехи, придется узнать все тонкости и нюансы процесса. Роль преподавателя сегодня возьму на себя я и поверьте мои ученики получат исчерпывающую информацию по этому поводу.

Где же он этот ВИН код?

Первое, что от вас потребуется дорогие друзья, это собственно найти тот самый идентификатор. Дело это незатейливое, когда знаешь, где смотреть. Если под рукой техпаспорт или свидетельство о регистрации, тогда миссия практически выполнена ведь в этих бумагах согласно закону, должен присутствовать предмет наших поисков. Более того, если автомобиль переоборудовался по тому же поводу там должны быть указаны все внесенные изменения в конструкцию транспортного средства.

Когда же документов нет, тепло одевайтесь и ступайте к автомобилю, нужно осмотреть следующие участки:

Основание лобового стекла;
Неподалеку приборной панели:
Возле водительского кресла;
Возле двигателя и т. д.

Когда же машина еще только на пути к вам и просто хочется заранее приготовить некоторые комплектующие или же просто узнать, за что отданы деньги, придется обращаться к дилеру. Однако в этом случае, необходимо обладать некоторыми данными об автомобиле такими как марка, год выпуска и т. д. Чем больше информации известно, тем лучше.

Как прочитать ВИН код?

Для того чтобы понять какую информацию несет в себе VIN код, давайте разберем по отдельности каждый его символ. Первые три именуются как WMI, по-нашему – индекс производительности, означают они следующее:

№1 – код географической зоны, помогающий понять место сборки автомобиля. Так, за Европой закреплены латинские буквы от S, до Z, за Африкой – А-Н, Азия – J-R. Цифрами обозначается: Северная Америка от 1, до 5, Южная Америка – 8, 9 и 0, страны Океании 6 и 7.
№2 – код указывает на определенную страну, где расположен завод. Некоторые государства помечаются сразу двумя символами, например: США маркируется комбинациями от 10, до 19, Канада – 2A-2W, Германия – W0-W
№3 – разоблачает непосредственно производителя. Национальная организация, присваивающая значение торговым маркам, выбирает символ к каждому конкретному бренду, тот же «Дженерал Моторс» маркируется буквой G. Однако для мелких производителей (до 500 машин в год) ради экономии тех самых букв, вели один общий символ – цифру 9.

Далее, идет описательная часть так называемая VDS-секция.

№4 и 5 – тип кузова и двигателя.
№6 – модель автомобиля.
№7 и 8 – могут содержать информацию о типе шасси, кузова, кабины и прочего.
№9 – значение, расположенное на этой позиции, не несет в себе никакой информации об автомобиле, но позволяет профессионалу определить подлинность шифра.

Заключительные семь символов ВИН кода группируются в отличительную секцию VIS.

№10 – год выпуска машины, расшифровка этого значения подробно изображена на фото.
№11-17 – в этом промежутки признанных стандартов нет поэтому производители указывают данные по своему усмотрению, это может быть комплектация, какие-то дополнительные функции и т. п.

Как сами видите друзья, если поломать голову, то расшифровать VIN код можно и без сторонней помощи. Конечно, указанной мной информации будет недостаточно для конкретного случая, но правильный вектор действий уже понятен. К тому же наличие в современном доме интернета, позволит узнать значение каждого символа в отдельности.

Специализированные интернет-сервисы

Впрочем, готов я и к вопросу большинства из вас, – как определить комплектацию затратив минимум усилий и времени? Если все эти символы загоняют вас в ступор, есть альтернатива! Та же «Всемирная паутина» предлагает массу проектов, которые бесплатно в онлайн-режиме позволят расшифровать ваш ВИН код. Все, что требуется от вас, это просто ввести его в специально отведенной строке. После чего вам представится обширная информация об вашей марки автомобиля. Я вам больше скажу, там же можно проверить не состоит ли машина в розыске, а также убедиться в ее отсутствие задолженностей перед банком.

Разумеется, если ваш автомобиль уже преклонного возраста (до 90 г. в.), данных будет минимум. Однако тип кузова, год выпуска, страну сборки и марку транспортного средства определить удастся и владельцам «старичков».

На этом сегодняшний «урок» закончен, надеюсь информация усвоена и использована! Увидимся в следующем году, до скорого!

Полная настройка цифрового экзамена — студенты AP

Когда выполнять этот шаг: за 1–3 дня до каждого цифрового экзамена.

Для каждого цифрового экзамена AP студенты должны выполнить этап настройки экзамена в приложении для цифрового тестирования. На этом этапе экзамен загружается на компьютер, на котором они собираются тестировать. Этот шаг необходимо выполнять за 1–3 дня до каждого экзамена. Без выполнения этого шага для каждого экзамена учащиеся не смогут пройти тестирование.

Вы должны завершить настройку экзамена на компьютере, который вы будете использовать для тестирования .
После завершения настройки экзамена вы не сможете поделиться своим тестовым компьютером с другим студентом, пока не успешно сдадите экзамен.

Если вы сдаетесь более одного экзамена, помните, что вам необходимо завершить настройку экзамена для каждого предмета цифрового экзамена, который вы планируете сдавать .

Настройка экзамена открывается за 3 календарных дня до каждого цифрового экзамена, и вы должны завершить настройку не позднее, чем за день до экзамена .

Пример: в Администрировании 2 цифровой экзамен AP по английской литературе и сочинению сдается во вторник, 18 мая.Установка открывается в субботу, 15 мая, и вам нужно закончить к понедельнику, 17 мая.

Чтобы получить доступ к настройке экзамена, запустите приложение цифрового тестирования и войдите в систему. Найдите свой экзамен на странице Мои экзамены и нажмите кнопку Начать настройку экзамена .

Настройка экзамена — это быстрый и простой процесс. Вот что вас попросят сделать:

Примите условия экзамена.
Подтвердите личную информацию.
Проверьте требования к устройству.
Решите, разрешите ли вы нам повторно использовать ваши ответы в образовательных, исследовательских и учебных целях.
Просмотрите контрольный список дня экзамена.
Посмотрите короткое видео.
Дождитесь загрузки экзамена.

После успешной загрузки экзамена вы увидите страницу, указывающую, что настройка экзамена завершена и ваше устройство готово к тестированию.

Измерение полного набора транспортных свойств концентрированного раствора твердого полимерного электролита

Полимерные электролиты на основе солей щелочных металлов в полиэтиленоксиде важны для возможного использования в аккумуляторных батареях как для электромобилей, так и для бытовой электроники. Мы измеряем полный набор транспортных свойств для одного конкретного бинарного раствора соли: трифторметансульфоната натрия в полиэтиленоксиде в широком диапазоне концентраций соли (от 0,1 до 2,6 M ) при определенной температуре (85 ° C). Измеренные свойства переноса включают проводимость, коэффициент диффузии соли и число переноса ионов натрия. Также определяется средний молярный коэффициент активности соли. Электропроводность измеряется стандартным методом импеданса на переменном токе.Коэффициент диффузии соли находится методом ограниченной диффузии. Коэффициенты проводимости и диффузии аналогичны по величине таковым у полиэтиленоксида. Число переноса и термодинамический фактор находят путем комбинирования данных концентрационной ячейки с результатами экспериментов по гальваностатической поляризации. Этот новый метод измерения числа переноса несложен для экспериментального выполнения и, тем не менее, не требует, чтобы раствор был либо разбавленным, либо идеальным.Дан теоретический анализ экспериментального метода, основанного на теории концентрированных растворов. Наше исследование подтверждает, что числа переноса, полученные в результате экспериментов, сохраняют фундаментальное значение в приложениях, включающих как установившиеся, так и переходные процессы, а также в системах, связывающих полимерный электролит с электродами всех типов (стехиометриями). Соответствующие числа переноса можно определить независимо от каких-либо сведений о химическом составе полимерного электролита. Найденные здесь числа переноса для иона натрия намного ниже, чем для иона лития, особенно в концентрированных растворах.Число переноса иона натрия отрицательно в более концентрированных растворах и достигает максимального значения 0,31 в диапазоне разбавленных концентраций. Результаты числа переноса интерпретируются с точки зрения комплексообразования иона натрия с анионными частицами.

WASFA (Вашингтонское заявление на государственную финансовую помощь)

Добро пожаловать в новый WASFA!
Ищете readysetgrad.org/WASFA? Вы попали в нужное место! Пожалуйста, обновите свои закладки и ссылки по этому адресу: wsac.wa.gov/WASFA

Беспокоитесь о конфиденциальности? Прочтите заявление о конфиденциальности WASFA.

Государственная финансовая помощь для студентов без документов и других избранных абитуриентов

Заявление на получение государственной финансовой помощи штата Вашингтон (WASFA) предназначено для людей, которые не подают федеральное заявление FAFSA. Люди, прошедшие WASFA, обращаются за государственной помощью. Существуют различные причины для заполнения WASFA вместо FAFSA:

Иммиграционный статус, или студент не имеет документов
Родители или члены семьи, не имеющие документов, не хотят подавать заявление FAFSA
Просроченные федеральные займы
Задолженность по федеральным субсидиям
Невозможность предоставления выборочного подтверждения услуги

Чтобы узнать, соответствуете ли вы критериям, заполните бесплатный WASFA, чтобы подать заявку на государственную финансовую помощь. Ваш колледж или программа сообщат вам, соответствуете ли вы требованиям штата в отношении финансовой помощи, после того, как они рассмотрят ваш WASFA.

Приложение

2021-22 Заявка WASFA открыта — 2022-23 WASFA откроется 1 октября

Какой год подачи заявления WASFA мне следует заполнять?

Заполните заявку WASFA на 2021-22 годы, если вы планируете поступить в колледж (в качестве нового студента или продолжающегося студента) с осеннего семестра 2021 года по весенний семестр 2022 года.
Заполните 2022-23 WASFA, если вы планируете поступить в колледж с осеннего семестра 2022 года по весенний семестр 2023 года. Заявление на 2022-23 годы станет доступным 1 октября 2021 года.
Планируете учиться летом? Пожалуйста, свяжитесь с колледжем, в котором вы будете учиться, чтобы подтвердить, какое заявление вам нужно заполнить, если вы записываетесь на летние сессии.

Новый пользователь

Впервые пройти WASFA
Анкета приемлемости

Вернувшийся пользователь

Внести исправление / Добавить школу
Подать заявку на новый год

Вы студент-резидент WASFA?

Студенты должны быть резидентами штата Вашингтон, чтобы платить за обучение в штате или получать финансовую помощь от штата.Резидентами Вашингтона могут быть как граждане США, так и неграждане, в том числе студенты без документов.

В большинстве случаев житель Вашингтона — это человек, проживающий в штате в течение одного года непосредственно перед поступлением в колледж или программу. Но есть и другие способы остаться резидентом. Узнайте больше на веб-странице студенческого общежития WSAC.

Ресурсы приложений

Руководство по применению WASFA (в разработке)

Есть вопросы? Свяжитесь с Вашингтонским советом по успеваемости студентов по электронной почте wasfa @ wsac.wa.gov или позвоните по номеру 888-535-0747 и выберите вариант 2.

Заявление о конфиденциальности WASFA

Вашингтонский совет по успеваемости студентов (WSAC) управляет финансовой помощью штата, включая грант Вашингтонского колледжа, стипендию для колледжа и Вашингтонскую заявку на государственную финансовую помощь (WASFA) для лиц без документов. Совет стремится предоставить возможности и поддержку для обеспечения того, чтобы каждый вашингтонский ученик мог продолжить образование после окончания средней школы.

Что касается опасений, которые могут возникнуть у студентов, родителей и других партнеров по поводу конфиденциальности информации, представленной в WASFA, цель заявки — предоставить информацию о праве на участие в колледжах и университетах Вашингтона, которые предлагают грант Вашингтонского колледжа и границу колледжа. Стипендия. WSAC передает информацию о заявках университетским городкам, перечисленным учащимся, чтобы эти школы могли определять право на обучение по месту жительства и финансовую помощь.Кампусам не разрешается использовать информацию для других целей или передавать данные третьим лицам.

WSAC обязуется защищать конфиденциальность информации и неприкосновенность частной жизни студентов и их семей. Вашингтон — это штат, который стремится предоставить студентам возможности и защитить права семей.

Теория множеств | Введение в математику колледжа

Для нас естественно разделить элементы на группы или наборы и рассмотреть, как эти наборы пересекаются друг с другом.Мы можем использовать эти наборы для понимания взаимоотношений между группами и для анализа данных опросов.

Основы

Коллекционер произведений искусства может владеть коллекцией картин, а меломан — коллекцией компакт-дисков. Любая коллекция предметов может составить набор .

Набор

Набор — это набор отдельных объектов, называемых элементами набора

Набор можно определить, описав его содержимое или перечислив элементы набора, заключенные в фигурные скобки.

Пример 1

Некоторые примеры наборов, определенных в описании содержимого:

Множество всех четных чисел
Набор всех книг о путешествии в Чили

ответы

Некоторые примеры наборов, определенных путем перечисления элементов набора:

{1, 3, 9, 12}
{красный, оранжевый, желтый, зеленый, синий, индиго, фиолетовый}

Набор просто определяет содержимое; порядок не важен.Набор, представленный как {1, 2, 3}, эквивалентен набору {3, 1, 2}.

Обозначение

Обычно мы будем использовать переменную для представления набора, чтобы облегчить обращение к этому набору позже.

Символ ∈ означает «является элементом».

Набор, не содержащий элементов, {}, называется пустым набором и обозначается ∅

Пример 2

Пусть A = {1, 2, 3, 4}

Чтобы отметить, что 2 является элементом множества, мы должны написать 2 ∈ A

Иногда коллекция может содержать не все элементы набора.Например, Крису принадлежат три альбома Мадонны. Хотя коллекция Криса — это набор, мы также можем сказать, что это подмножество большего набора всех альбомов Мадонны.

Подмножество

Подмножество набора A — это еще один набор, который содержит только элементы из набора A , но не может содержать все элементы A .

Если B является подмножеством A , мы пишем B ⊆ A

Правильное подмножество — это подмножество, которое не идентично исходному набору — оно содержит меньше элементов.

Если B является правильным подмножеством A , мы пишем B ⊂ A

Пример 3

Рассмотрим эти три набора:

A = набор всех четных чисел
B = {2, 4, 6}
C = {2, 3, 4, 6}

Здесь B ⊂ A , поскольку каждый элемент B также является четным числом, так же как и элемент A .

Более формально мы могли бы сказать B ⊂ A , поскольку если x ∈ B , то x ∈ A .

Верно также, что B ⊂ C .

C не является подмножеством A , поскольку C содержит элемент 3, который не содержится в A

Пример 4

Предположим, что набор содержит пьесы «Много шума из ничего», «Макбет» и «Сон в летнюю ночь». Какой большой набор это может быть подмножество?

Здесь есть много возможных ответов. Один из них — пьесы Шекспира. Это также подмножество всех когда-либо написанных пьес.Это также часть всей британской литературы.

Попробовать

Набор A = {1, 3, 5}. Какой большой набор это может быть подмножество?

Соединение, пересечение и дополнение

Обычно наборы взаимодействуют. Например, вы и ваш новый сосед по комнате решили устроить домашнюю вечеринку, и вы оба приглашаете свой круг друзей. На этой вечеринке объединяются два набора, хотя может оказаться, что есть друзья, которые были в обоих наборах.

Союз, пересечение и дополнение

Объединение двух наборов содержит все элементы, содержащиеся в любом наборе (или в обоих наборах).Объединение имеет обозначение A ⋃ B. Более формально: x ∊ A ⋃ B , если x ∈ A или x ∈ B (или оба)

Пересечение двух наборов содержит только элементы, которые есть в обоих наборах. Пересечение обозначено как A ⋂ B. Более формально: x ∈ A ⋂ B , если x ∈ A и x ∈ B.

Дополнение набора A содержит все, что равно , а не в наборе A . Дополнение обозначается как A ’, или A, ^c, или иногда ~ A .

Пример 5

Рассмотрим комплектов:

A = {красный, зеленый, синий}
B = {красный, желтый, оранжевый}
C = {красный, оранжевый, желтый, зеленый, синий, фиолетовый}

Найдите следующее:

Найти A ⋃ B
Найдите A ⋂ B
Найдите A ^c ⋂ C

ответы

Объединение содержит все элементы в любом наборе: A ⋃ B = {красный, зеленый, синий, желтый, оранжевый} Обратите внимание, что мы указываем красный только один раз.
Перекресток содержит все элементы в обоих наборах: A ⋂ B = {красный}
Здесь мы ищем все элементы, которые являются , а не в наборе A , а также находятся в C . A ^c ⋂ C = {оранжевый, желтый, фиолетовый}

Попробовать

Используя наборы из предыдущего примера, найдите A ⋃ C и B ^c ⋂ A

Обратите внимание, что в приведенном выше примере было бы сложно просто попросить A ^c , так как все, от цвета фуксии до щенков и арахисового масла, входит в комплект.По этой причине дополнения обычно используются только на перекрестках или когда у нас есть универсальный набор.

Универсальный набор

Универсальный набор — это набор, который содержит все интересующие нас элементы. Это должно быть определено контекстом.

Дополнение относится к универсальному набору, поэтому A ^c содержит все элементы универсального набора, которых нет в A .

Пример 6

Если бы мы обсуждали поиск книг, универсальный набор мог бы включать все книги в библиотеке.
Если бы мы группировали ваших друзей на Facebook, универсальный набор состоял бы из всех ваших друзей на Facebook.
Если вы работали с наборами чисел, универсальный набор мог бы состоять из целых чисел, всех целых чисел или всех действительных чисел

Пример 7

Предположим, что универсальным набором является U = все целые числа от 1 до 9. Если A = {1, 2, 4}, то A ^c = {3, 5, 6, 7, 8, 9}.

Как мы видели ранее с выражением A ^c ⋂ C , операции над множествами могут быть сгруппированы вместе.Символы группировки можно использовать так же, как и в арифметике, — для задания порядка операций.

Пример 8

Предположим, что H = {кошка, собака, кролик, мышь}, F = {собака, корова, утка, свинья, кролик} и W = {утка, кролик, олень, лягушка, мышь}

Найти ( H ⋂ F ) ⋃ W
Найдите H ⋂ ( F ⋃ W )
Найти ( H ⋂ F ) ^c ⋂ W

Решения

Начнем с перекрестка: H ⋂ F = {собака, кролик}.Теперь мы объединяем этот результат с W : ( H ⋂ F ) ⋃ W = {собака, утка, кролик, олень, лягушка, мышь}
Начнем с объединения: F ⋃ W = {собака, корова, кролик, утка, свинья, олень, лягушка, мышь}. Теперь мы пересекаем этот результат с H : H ⋂ ( F ⋃ W ) = {собака, кролик, мышь}
Начинаем с перекрестка: H ⋂ F = {собака, кролик}. Теперь мы хотим найти элементы W , которые равны , а не в H ⋂ F. ( H ⋂ F) ^c ⋂ W = {утка, олень, лягушка, мышь}

Диаграммы Венна

Чтобы визуализировать взаимодействие множеств, Джон Венн в 1880 году подумал об использовании перекрывающихся кругов, опираясь на аналогичную идею, которую использовал Леонард Эйлер в восемнадцатом веке. Эти иллюстрации теперь называются Диаграммы Венна .

Диаграмма Венна

Диаграмма Венна представляет каждый набор в виде круга, обычно рисуемого внутри контейнера, представляющего универсальный набор.Перекрывающиеся области указывают на элементы, общие для обоих наборов.

Базовые диаграммы Венна могут иллюстрировать взаимодействие двух или трех наборов.

Пример 9

Создайте диаграммы Венна для иллюстрации A ⋃ B , A ⋂ B и A ^c ⋂ B

A ⋃ B содержит все элементы из набора или .

A ⋂ B содержит только те элементы в обоих наборах — в перекрытии кругов.

A ^c будет содержать все элементы , а не в наборе A . A ^c ⋂ B будет содержать элементы в наборе B , которых нет в наборе A .

Пример 10

Используйте диаграмму Венна для иллюстрации ( H ⋂ F ) ^c ⋂ W

Начнем с идентификации всего в наборе H ⋂ F

Теперь ( H ⋂ F ) ^c ⋂ W будет содержать все , а не в указанном выше наборе, который также находится в наборе W .

Пример 11

Создайте выражение, представляющее выделенную часть показанной диаграммы Венна.

Элементы в выделенном наборе — это в наборах H и F , но их нет в наборе W . Таким образом, мы могли бы представить этот набор как H ⋂ F ⋂ W ^c

Попробовать

Создайте выражение для обозначения выделенной части диаграммы Венна, показанной

Мощность

Часто нас интересует количество элементов в наборе или подмножестве.Это называется мощностью множества.

Мощность

Количество элементов в наборе — это мощность этого набора.

Мощность множества A часто обозначается как | A | или n ( A )

Пример 12

Пусть A = {1, 2, 3, 4, 5, 6} и B = {2, 4, 6, 8}.

Какая мощность у B ? A ⋃ B , A ⋂ B ?

ответов

Мощность элемента B равна 4, так как в наборе 4 элемента.

Мощность элемента A ⋃ B равна 7, поскольку A ⋃ B = {1, 2, 3, 4, 5, 6, 8}, который содержит 7 элементов.

Мощность элемента A ⋂ B равна 3, поскольку A ⋂ B = {2, 4, 6}, который содержит 3 элемента.

Пример 13

Какова мощность числа P = набор английских названий месяцев в году?

ответов

Количество элементов этого набора равно 12, поскольку в году 12 месяцев.

Иногда нас может интересовать мощность объединения или пересечения множеств, но мы не знаем фактических элементов каждого набора. Это обычное дело в геодезии.

Пример 14

В ходе опроса 200 человек спрашивают «Какой напиток вы пьете утром» и предлагают варианты выбора:

Только чай
Только кофе
И кофе, и чай

Предположим, 20 сообщают только чай, 80 сообщают только кофе, 40 сообщают и то, и другое. Сколько людей пьют чай по утрам? Сколько людей не пьют ни чая, ни кофе?

ответов

На этот вопрос проще всего ответить, создав диаграмму Венна.Мы видим, что людей, пьющих чай, можно найти, добавив тех, кто пьет только чай, к тем, кто пьет и то, и другое: 60 человек.

Мы также можем видеть, что те, кто не пьет ни того, ни другого, не входят ни в одну из трех других групп, поэтому мы можем подсчитать их, вычтя из мощности универсального набора, 200.

200-20-80-40 = 60 человек, которые не пьют.

Пример 15

В ходе опроса задается вопрос: «Какими онлайн-сервисами вы пользовались за последний месяц?»

Твиттер
Facebook
Использовали оба

Результаты показывают, что 40% опрошенных использовали Twitter, 70% использовали Facebook и 20% использовали оба.Сколько людей не использовали ни Twitter, ни Facebook?

ответов

Пусть T будет набором всех людей, которые использовали Twitter, а F будет набором всех людей, которые использовали Facebook. Обратите внимание, что, хотя мощность F составляет 70%, а мощность T составляет 40%, мощность F ⋃ T не просто 70% + 40%, так как это учитывает тех, кто использует оба услуги дважды. Чтобы найти мощность F ⋃ T , мы можем сложить мощность F и мощность T , а затем вычесть те, которые находятся в пересечении, которые мы посчитали дважды.В символах,

n ( F ⋃ T ) = n ( F ) + n ( T ) — n ( F ⋂ T )
n ( F ⋃ T ) = 70% + 40% — 20% = 90%

Теперь, чтобы узнать, сколько людей не использовали ни одну из услуг, мы ищем мощность ( F ⋃ T ) c . Поскольку универсальный набор содержит 100% людей и мощность F T = 90%, мощность ( F ⋃ T ) c должна равняться остальным 10%.

Предыдущий пример проиллюстрировал два важных свойства

Свойства мощности

n ( A ⋃ B ) = n ( A ) + n ( B ) — n ( A ⋂ B )

n ( Ac ) = n ( U ) — n ( A )

Обратите внимание, что первое свойство также может быть записано в эквивалентной форме путем определения мощности пересечения:

n ( A ⋂ B ) = n ( A ) + n ( B ) — n ( A ⋃ B )

Пример 16

Было опрошено пятьдесят студентов, и их спросили, будут ли они проходить курс социальных наук (SS), гуманитарных наук (HM) или естественных наук (NS) в следующем квартале.

21 проходили курс SS	26 проходили курс HM
19 проходили курс NS	принимали 9 SS и HM
7 принимали SS и NS	10 принимали HM и NS
3 брали все три	7 не принимали

Сколько студентов проходят только курс SS?

ответов

Может быть полезно взглянуть на диаграмму Венна.Из приведенных данных мы знаем, что в районе е учатся 3 студента, а в районе х — 7 студентов.

Поскольку 7 студентов проходили курсы SS и NS, мы знаем, что n ( d ) + n ( e ) = 7. Поскольку мы знаем, что в регионе 3 3 студента, должно быть 7 — 3 = 4 студенты в районе д .

Аналогичным образом, поскольку есть 10 студентов, изучающих HM и NS, включая регионы e и f , в регионе f должно быть 10 — 3 = 7 студентов.

Поскольку 9 студентов изучали SS и HM, должно быть 9 — 3 = 6 студентов в регионе b .

Итак, мы знаем, что 21 студент проходил курс SS. Сюда входят студенты из регионов a, b, d, и e . Поскольку мы знаем количество студентов во всех регионах, кроме a , мы можем определить, что 21 — 6 — 4 — 3 = 8 студентов находятся в регионе a .

8 студентов проходят только курс SS.

Попробовать

Было опрошено сто пятьдесят человек, и их спросили, верят ли они в НЛО, призраков и снежного человека.

43 верили в НЛО	44 верят в призраков
25 верили в снежного человека	10 верили в НЛО и привидения
8 верили в призраков и снежного человека	5 верили в НЛО и снежного человека
2 верили во всех троих

Сколько опрошенных верили хотя бы в одно из этих утверждений?

Мужской профиль SGI Полный комплект для гольфа — Carry

Запатентованная Wilson система «Custom fit in a box» ™ имеет тринадцать вариантов размеров, подходящих для любого игрока!
Большой драйвер объемом 460 куб. См. Разработан с использованием технологии Super Game Improvement, чтобы улучшить новые впечатления от игры в гольф.
Глубокие, утяжеленные по периметру 431 утюги из нержавеющей стали с очень низким центром тяжести для повышения точности и расстояния.
Легкая сумка премиум-класса с регулируемым плечом Air Flow ™ ремешки, прочная верхняя часть ручки, множество карманов и самоактивирующаяся подставка
«Easy Launch» ™ Sand Wedge отличается очень низким весом и широкой подошвой для лучшего контроля над травой и улучшенного броска.
Популярная клюшка с утяжелением пятки и носка с мягким захватом обеспечивает превосходную обратную связь , ощущение и точность
Древесина фервея высокого старта и легкость попадания Гибридная технология заменяет длинные утюги
Накидки на голову из материала премиум-класса с фланелевой подкладкой и мягкими всепогодными захватами

DRIVER Кованый титановый композит увеличенного размера на 460 куб.

Большое лицо в зоне наилучшего восприятия Водитель с более прочным чердаком для большего расстояния.

FAIRWAY WOOD Большой деревянный фервей для зоны наилучшего восприятия с графитовым стержнем, усиленным наконечником, и всепогодной рукояткой. Прочный лофт и конструкция с низким весом позволяют играть как на фервее, так и на грубых трассах.

HYBRID Гибридная клюшка, легкая в попадание, с неглубокой головкой и высокой технологией взлета.

Усовершенствованная конструкция головки обеспечивает лучшую траекторию полета, чем длинные удилища, с которыми трудно попасть, что приводит к более длинным и прямым выстрелам.

УТЮГИ Мощные утюги из нержавеющей стали с очень низким центром тяжести, облегчающие запуск мяча. Чрезвычайно утяжеление по периметру создает огромную золотую середину для повышения точности даже при попаданиях вне центра.

Технология «Large Unsupported Face» для увеличения скорости мяча и увеличения расстояния!

КЛИН ПЕСКА Дизайн улучшения игры помогает запускать мяч из бункера.

Сверхмалый вес и очень широкая подошва прорезают песок для большего контроля.

PUTTER Популярная клюшка с утяжелением пятки и носка с устойчивостью головы и технологией выравнивания.

Изолированная зона наилучшего восприятия для улучшенного ощущения и точности

ЧЕХЛЫ НА ГОЛОВУ Популярные чехлы для головы премиум-класса защищают ваши ценные вложения.

Мягкая фланелевая подкладка предохраняет древесину и гибридное лакокрасочное покрытие от повреждений.

СУМКА ДЛЯ ПЕРЕНОСКИ С РУЧКОЙ Прочная и легкая самоактивирующаяся сумка на стойке с просторными карманами для хранения. Мягкая семиступенчатая коробка с удобной подъемной ручкой защищает графитовые валы, обеспечивая длительную работу. Эргономичные двойные лямки повышают комфорт во время движения и снимают усталость.

ПЛЕЧЕВОЙ РЕМЕНЬ AIRFLOW ™ Удобный сетчатый ремешок поверх мягкой шестигранной сердцевины способствует циркуляции воздуха и обеспечивает комфорт.

Полный набор клонов ORF библиотеки ASKA Escherichia coli (Полный набор архивов ORF E. coli K -12): Уникальные ресурсы для биологических исследований | Исследование ДНК

Аннотация

Основываясь на данных геномной последовательности штамма Escherichia coli K-12, мы сконструировали полный набор клонированных индивидуальных генов, кодирующих гистидин-меченые белки с или без GFP, слитые для функционального геномного анализа.Каждый клон кодирует белок предсказанной ORF, присоединенный гистидинами, и семь аминокислот-спейсеров на N-конце, и пять аминокислот-спейсеров и GFP на C-конце. Сайты рестрикции Sfi I генерируются как на N-, так и на С-концевых границах ORF при клонировании, что позволяет легко переносить ORF в другие векторные системы путем разрезания Sfi I. Экспрессия клонированной ORF находится под контролем индуцируемый IPTG промотор, который строго репрессируется продуктом гена репрессора lacI ^q .Набор клонированных открытых рамок считывания, описанный здесь, должен предоставить уникальные ресурсы для систематических функциональных геномных подходов, включая (i) конструирование ДНК-микрочипов, (ii) производство и очистку белков, (iii) анализ локализации белка путем мониторинга флуоресценции GFP и (iv) анализ. белок-белкового взаимодействия.

1. Введение

Более 200 полных последовательностей генома микробов теперь доступны из общедоступных баз данных, таких как DDBJ в Национальном институте генетики (веб-страница авторов), GenBank в Национальном центре биотехнологической информации (веб-страница авторов) и EMBL-EBI в Европейском институте биоинформатики (Веб-страница автора).1 Среди них две прокариоты, грамположительная бактерия Bacillus subtilis и грамотрицательная бактерия Escherichia coli , а также одноклеточный эукариот Saccharomyces cerevisiae , широко использовались в качестве модельных организмов для фундаментальных биологических исследований. 2–4 Полная последовательность генома показала, что, хотя эти микроорганизмы относятся к числу наиболее тщательно изученных генетических систем, экспериментально охарактеризовано менее 50% их соответствующих генов.Данные о последовательности генома являются ценным ресурсом не только для информации, дополняющей традиционные биологические подходы, но и для разработки новых подходов, известных как «функциональная геномика», области исследований компьютерного анализа полных геномов с последующей экспериментальной проверкой возникающих гипотез. 5, 6

Информация о последовательности генома проливает новый свет на природу и взаимосвязь между бактериальными генами, включая предки, семейства генов, модули и мотивы в сравнительных терминах.7–9 Сравнение хромосомного положения генов внутри и между видами может также выявить аспекты эволюции генома и функционального сцепления между генами. 10–12 Подробная информация о структуре и функции генома и, в частности, отдельных генных продуктов является наиболее обширной и всеобъемлющей для E. coli , и примерно половина генных продуктов была охарактеризована с использованием различных генетических, биохимических и молекулярно-биологические методы. На основе обширных данных, полученных в результате этого анализа, гены с известной функцией были разделены на несколько отдельных категорий.13 Важность генома E. coli как ведущей модельной системы, кажется, быстро получила признание для будущих исследований функциональной геномики и системной биологии.

Однако для дальнейшего выяснения природы генов с неизвестной функцией были бы особенно полезны различные ресурсы, такие как отдельные клонированные гены, деструктивные или делеционные мутанты для каждого из предсказанных генов. Данные полных геномных последовательностей позволили построить такие ресурсы в Mycoplasma genitalium , Bacillus subtilis и Saccharomyces cerevisiae .14–17 Конструирование полногеномных клонов в E. coli имеет долгую историю, включая плазмидные клоны, 18 космидную библиотеку, 19–21 и клоны лямбда фага. 22, 23

Кроме того, в последнее время накапливается все большее количество белков, называемых «подрабатывающими белками», выполняющих две или более различных функций. 24 Таким образом, это будет хорошей возможностью для переоценки сообщаемой функции известных генов и изучения новой функции с использованием крупномасштабных ресурсов, таких как клонированные гены, указанные здесь, а также делеции и другие мутанты.

Здесь мы описываем полный набор клонов генов в Escherichia coli , который должен позволить нам выполнять систематический функциональный анализ не только генов с неизвестной функцией, но и генов с известной функцией для изучения их функции. Каждую из предсказанных ORF, кроме стартового и стоп-кодонов, амплифицировали с помощью ПЦР с последующим клонированием в многокопийный плазмидный вектор. Каждый продукт помечен гистидином на своем N-конце, а GFP слит на его C-конце. Экспрессия клонированных генов направляется промотором P _{T5- lac}, который может быть активирован IPTG, но обычно репрессируется lacI ^q , помещенным в cis .

2. Материалы и методы

2.1. Штаммы и условия роста

E. coli K-12, штамм AG1 [ recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 ( r _K ^— m _K ⁺) supE44 relA1 ], который демонстрирует высокий Эффективность трансформации, приобретенная у Stratagene, Inc., была использована для всех экспериментов по конструированию плазмид и других экспериментов.

Клетки обычно выращивали в среде Лурия-Бертани (LB) [1% бакто-триптон (BD Diagnostic Systems), 0.5% дрожжевой экстракт (BD Diagnostic Systems), 0,5% NaCl], содержащий 50 мкг / мл ампициллина (Meiji Seika Kaisha, Ltd), 30 мкг / мл канамицина (Wako Pure Chemical Industries, Ltd) или хлорамфеникол (Nacalai Tesque, Inc. .) как требуется. Изопропил-β-d-тиогалактозид (IPTG) использовали в концентрации 0,1 мМ для индукции экспрессии клонированного гена.

2.2. Праймеры для ПЦР

Пара праймеров для ПЦР была сконструирована для амплификации каждой из предсказанных ORF E. coli , которая начинается со второго кодона до последнего аминокислотного кодона, минуя кодоны инициации и терминации.Каждый праймер содержит 3 или 2 дополнительных основания на 5′-конце, за которыми следуют 20 или 21 основание ORF-специфической последовательности для N- или C-конца, соответственно. Дополнительные нуклеотиды были включены для облегчения направленного клонирования и создания сайтов рестрикции Sfi I. Таким образом, все N-концевые праймеры имеют последовательность 5′-GCC (20N) -3 ‘, где 20N специфична для каждой ORF, начинающейся со второго кодона. Точно так же все C-концевые праймеры имеют последовательность 5 ‘- (21N) CC-3′, где 21N специфична для каждой ORF, оканчивающейся последним аминокислотным кодоном.Полученный в результате фрагмент ПЦР имеет последовательность от 5’-GCC-2 до аминокислотного кодона -GG-3 ‘. Все праймеры фосфорилировали перед использованием в реакции ПЦР.

В следующих особых случаях последовательности праймеров были модифицированы, чтобы избежать случайного образования сайтов рестрикции Sfi I. (i) Если последовательность ORF окажется ATG NNN NNG GCC N… .N NNN GGC CNN NNN TAA, то амплифицированный с помощью ПЦР фрагмент будет GCC NNN NNG GCC N… .N NNN GGC CNN NNN GG и полученная плазмида после клонирование будет иметь последовательность «… GGCCCTGAG (GGCC NNN NNG GCC) N….N NNN GGC CNN NNN (GGCC TATGCGGCC)… ’, генерирующий дополнительные сайты Sfi I (подчеркнуты) помимо этих на периферии (в скобках). Чтобы избежать этого осложнения, остаток G третьего кодона NNG был заменен соответствующим остатком без изменения кодируемой аминокислоты, а третий остаток последнего аминокислотного кодона был изменен с GGC на GGT.

Если третий остаток последнего аминокислотного кодона представляет собой G, а последовательность ORF — «ATG NN… .NN NNG TAA», то амплифицированный с помощью ПЦР фрагмент будет иметь последовательность «GCC ATG NN…».NN NNG GG ’, и этот фрагмент имеет сайт Sfi I, даже если последний остаток G был неожиданно удален под действием экзонуклеазной активности, загрязненной полимеразой или рестрикционным ферментом. Чтобы избежать этого, последний аминокислотный кодон был заменен синонимичным кодоном, в котором отсутствует G у третьего остатка. Однако, когда последним кодоном был Met (ATG) или Trp (TGG), никаких изменений не производилось из-за отсутствия синонимичного кодона done.

2.3. ПЦР-амплификация

Реакцию амплификации ПЦР

проводили в 96-луночных планшетах.Чтобы свести к минимуму ошибки ПЦР во время амплификации, 1 ед. ДНК-полимеразы KOD (TOYOBO CO., Ltd.) использовали в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 20–30 нг ДНК клона фага Kohara или геномную ДНК E. coli , по 1,0 мкМ каждой праймер и 200 мкМ дНТФ. Использовали рекомбинантную форму ДНК-полимеразы Thermococcus kodakaraensis KOD, имеющей 3 ‘→ 5’-зависимую от экзонуклеазы корректирующую активность и проявляющую очень высокую точность. 25, 26. Реакции были выполнены в соответствии с инструкциями производителя, и амплифицированные фрагменты были затуплены с помощью полимеразы KOD.Реакции ПЦР проводили в 25 циклах при 95 ° C в течение 15 секунд, 64 ° C в течение 15 секунд, 72 ° C в течение 4 минут с последующей последней инкубацией при 72 ° C в течение 5 минут. Все реакции выполнялись автоматическим реакционным роботом для секвенирования PRIZM877 (Applied BioSystems), чтобы избежать ошибок, возникающих из-за ручного управления.

Около 99% ORF (4217) могут быть успешно амплифицированы ДНК-полимеразой KOD; многие из неудачных открытых рамок считывания имели размер> 2 т.п.н., и большинство из них (~ 90%) можно было амплифицировать с помощью DynaZyme (Finzymes Oy). Остальные ORF (~ 1% от общего количества) могут быть получены с использованием ДНК-полимеразы LATaq (TAKARA BIO, Inc.).

2.4. Очистка фрагмента ПЦР

Все продукты ПЦР очищали электрофорезом в агарозном геле (0,7–1,5% гель) в 1 × TAE-буфере в зависимости от длины амплифицированных фрагментов. Гели окрашивали SyberGOLD (Molecular Probes, Inc.) и визуализировали светом 480 нм, чтобы минимизировать повреждение ДНК. Затем изображения были сфотографированы и проверены на их размер. Продукты ПЦР ожидаемого размера были вырезаны и элюированы с использованием MagExtractor (TOYOBO Co., Ltd) в соответствии с инструкциями производителя.

2,5. Клонирование индивидуальных ORF в вектор pCA24N

фрагментов ДНК, очищенных электрофорезом в агарозном геле, индивидуально лигировали с ДНК вектора pCA24N, которая была расщеплена Stu I и дефосфорилирована. Лигирование проводили в течение 1 ч при 16 ° C с использованием набора для лигирования (TAKARA BIO, Inc.). Лигированную ДНК осаждали этанолом, промывали 70% этанолом, сушили в вакууме и ресуспендировали в 10 мкл H ₂ O. Раствор ДНК (1 мкл) использовали для электротрансформации, отбирая устойчивость к хлорамфениколу на LB-планшете.Компетентные клетки (50 мкл), приготовленные в соответствии с лабораторными руководствами 27, смешивали с 1 мкл раствора ДНК в ледяной 0,2-см кювете (Bio-Rad Laboratories, Inc.), обрабатывали при 2,5 кВ с помощью 25 мФ и 200 Ом. с последующим добавлением 1 мл среды SOC (2% бакто триптон, 0,5% дрожжевой экстракт, 10 мМ NaCl, 2,5 мМ KCl, 10 мМ MgCl ₂, 10 мМ MgSO ₄, 20 мМ глюкоза). Затем клетки переносили в каждую из 96 отформатированных глубоких лунок и оставляли для восстановления в течение 1 ч при 37 ° C при встряхивании при 250 об.вечера. перед нанесением на селективную среду.

2.6. Подтверждение структуры клонов ORF

Плазмидные клоны

очищали с помощью набора для очистки 96-луночной плазмидной ДНК в формате Multi Screen (Millipore Corporation), и их структуру подтверждали расщеплением ферментом рестрикции Bgl I или Sfi I и исследованием электрофорезом в агарозном геле. Клоны с ожидаемым гелеобразным рисунком далее анализировали прямым секвенированием продуктов, амплифицированных ПЦР, полученных с использованием праймера pCA-F 5′-GGCGTATCACGAGGCCCTTTCGTCTTCACC-3 ‘и праймера pCA-R3 5′-TTGCATCACCTTCACCCTCTCCACTGACAG-3’.Праймеры, используемые для секвенирования, представляли собой праймер F-CA 5′-CATTAAAGAGGAGAAATTAACTATGAGAGG-3 ‘со стороны, меченной His, и праймер R-CA 5′-CATCTAATTCAACAAGAATTGGGACAACTC-3’ со стороны GFP. Реакцию секвенирования проводили с использованием модели ABI PRISM 377, 3700 или 3730 в соответствии со стандартным протоколом Big-dye (Applied BioSystems).

2.7. Флуоресценция GFP

Колонии образовывались на чашках LB, содержащих 30 мкг / мл хлорамфеникола с (1 мМ) или без IPTG. Флуоресценцию GFP отдельных колоний визуализировали светом 480 нм и фотографировали с помощью IMAGE FREEZER AE-6905 (ATTO CORPORATION).

2,8. Очистка белка

Клетки, продуцирующие меченный гистидином белок из клона, выращивали при 37 ° C в 5 мл среды LB с добавлением 30 мкг / мл хлорамфеникола до OD ₆₀₀ 0,3. Образцы отбирали через 2 часа после добавления 1 мМ IPTG. Клетки собирали центрифугированием (10000 об / мин × 3 мин при 4 ° C) и ресуспендировали в 400 мкл холодного буфера I [50 мМ фосфат натрия (pH 7,0), 200 мМ NaCl, ингибитор протеиназы (Hoffmann-La Roche Ltd). ].После этого все манипуляции проводили при 4 ° C. Неочищенные экстракты клеток получали обработкой ультразвуком (5 × 5 с, уровень 3, ультразвуковой процессор Astrason) и центрифугированием (16 000 об / мин × 15 мин). Неочищенные клеточные экстракты загружали на 30 мкл никелевой (Ni ²⁺) -колонки [приготовленной в соответствии с инструкциями производителя (QIAGEN, Inc) и уравновешенной буфером I]. Аффинную хроматографию экстрактов проводили при 4 ° C. Загруженные колонки трижды промывали 1 мл буфера 2 [Буфер I содержит 20 мМ имидазола и 0.05% n -октил-β-глюкозид (Pierce Biotechnology, Inc)] и белки элюировали буфером 3 [50 мМ Трис-HCl (pH 6,8), 2% SDS, 0,1% бромфенолового синего, 10% глицерина, 100%. мМ ДТТ, 6 М мочевина и 250 мМ имидазол]. Элюированные белки анализировали с помощью SDS – PAGE с градиентом 7,5–15% (BIOCRAFT Co., Ltd.) с последующим окрашиванием кумасси бриллиантовым синим.

3. Результаты и обсуждение

3.1. Конструирование клонирующего вектора pCA24N

Чтобы клонировать все гены Escherichia coli , мы сконструировали плазмидный вектор со следующими свойствами: (i) плазмида с высоким числом копий, (ii) IPTG-индуцируемая экспрессия клонированной ORF репрессия экспрессии с помощью lacI ^q , (iii) гистидиновая метка, прикрепленная к N-концевому концу ORF, (iv) слияние в рамке считывания с GFP на C-конце, (v) создание сайтов рестрикции Sfi I на обеих границах клонированной ORF ( Инжир.1) (см. Ниже). Конструкция pCA24N схематически показана на рис.2. Экспрессия целевой ORF, вставленной в сайт Stu I, направляется IPTG-индуцибельным промотором, P _{T5- lac}. Каждая ORF сливается в рамке считывания со спейсерами аминокислот Histidine tag 7 на N-конце (фиг. 3).

Рисунок 1

Создание сайтов Sfi I путем клонирования целевой ORF только в правильном направлении. Верхняя строка — сайт клонирования pCA24N.Для клонирования целевой рамки считывания в сайт Stu I (заштриховано) вставляли область, кодирующую белок с тупым концом ПЦР-амплифицированный с тремя (GCC) и двумя (GG) дополнительными нуклеотидами на N- и C-конце соответственно. треугольник). Лигирование тупоконечного 5′-GCCXXX… XXXGG-3 ‘фрагмента (X указывает нуклеотиды целевого гена) генерирует Sfi I сайтов на обеих границах фрагмента, когда лигирование было выполнено в правильном направлении (слева), но не в противоположном направление (вправо). Открытые стрелки показывают фрагменты, амплифицированные с помощью ПЦР, а острие стрелки указывает направление ORF.

Рисунок 1

Создание сайтов Sfi I путем клонирования целевой ORF только в правильном направлении. Верхняя строка — сайт клонирования pCA24N. Для клонирования целевой рамки считывания в сайт Stu I (заштриховано) вставляли область, кодирующую белок с тупым концом ПЦР-амплифицированный с тремя (GCC) и двумя (GG) дополнительными нуклеотидами на N- и C-конце соответственно. треугольник). Лигирование тупоконечного 5′-GCCXXX… XXXGG-3 ‘фрагмента (X указывает нуклеотиды целевого гена) генерирует Sfi I сайтов на обеих границах фрагмента, когда лигирование было выполнено в правильном направлении (слева), но не в противоположном направление (вправо).Открытые стрелки показывают фрагменты, амплифицированные с помощью ПЦР, а острие стрелки указывает направление ORF.

Рисунок 2

Построение вектора. Фрагмент pQB2, 39 с тупым концом длиной 4,1 kb Bam HI и Sac I лигировали с фрагментом устойчивости к канамицину ( kan ), который был амплифицирован из pHSG299, 40 с использованием праймеров олиго ДНК: 5′- CGGCCCTGAGGCCTTCAACTCAGCAAAAGTTCG-3 ‘и 5′-GGCCATATAGGCCTGAATGGCGAATGCGATTTATTC-3’ для создания pQA2-Km.Чтобы получить фрагмент, содержащий lacI ^q и терминатор, pGEX-2TK, 41 был расщеплен Aat II и Eam I и имел тупой конец. Полученный фрагмент lacI ^q лигировали с фрагментом устойчивости к хлорамфениколу Bam HI pNK2884, 42 с тупыми концами для создания pCX2TK1. Фрагмент с тупым концом Aat II и Nhe I pQA2-Km и фрагмент с тупым концом Sma I– Fsp I лигировали для создания pCA21.Исходный GFP является термолабильным и имеет слабую флуоресценцию или ее отсутствие при температуре 37 ° C или выше. Чтобы заменить исходный GFP на теплостойкую мутантную форму, фрагмент Stu I– Sma I pCA21 лигировали с амплифицированным с помощью ПЦР фрагментом GFP из pGFPgcn4, 28 с помощью праймеров олиго ДНК, имеющих сайт рестрикции Not I: 5 ′ -CCTATGCGGCCGCAGTAAAGGAGAAGAACTTTTC-3 ′ и 5′-TTAGCGGCCGCTTATTTGTATAGTTCATCCATGCC-3 ′. Not I сайтов обоих праймеров были сконструированы для удаления GFP после клонирования.Ориджин репликации и гистидиновая метка полученного вектора, названного pCA24N, были получены из pGEX-2TK и pQE31 (родительская плазмида pQB2) соответственно.

Рисунок 2

Рисунок 3

Прогнозируемые аминокислотные последовательности около N- и C-концевых областей клонированной открытой рамки считывания. Стрелка указывает на целевую ORF и пару праймеров, используемых для ПЦР-амплификации. Нижние нуклеотидные и аминокислотные последовательности указывают на предсказанную окончательную структуру вокруг сайта клонированной ORF.Белки-продукты должны содержать 6 гистидин, 7 и 5 аминокислот на N- и C-концах целевого гена, соответственно, за которыми следует фрагмент GFP: 6xHisThrAspProAlaLeuArgAlaXXX… XXXGlyLeuCysGlyArg… GFP, где XXX… XXX указывает на предпоследнюю аминокислоту. кислотный кодон целевого гена.

Рисунок 3

Предсказанные аминокислотные последовательности около N- и C-концевых областей клонированной ORF. Стрелка указывает на целевую ORF и пару праймеров, используемых для ПЦР-амплификации.Нижние нуклеотидные и аминокислотные последовательности указывают на предсказанную окончательную структуру вокруг сайта клонированной ORF. Белки-продукты должны содержать 6 гистидин, 7 и 5 аминокислот на N- и C-концах целевого гена, соответственно, за которыми следует фрагмент GFP: 6xHisThrAspProAlaLeuArgAlaXXX… XXXGlyLeuCysGlyArg… GFP, где XXX… XXX указывает на предпоследнюю аминокислоту. кислотный кодон целевого гена.

Ген, кодирующий мутантную форму GFP 28, помещали сразу после ORF для получения слитого белка.Это в основном предназначено для определения локализации белкового продукта в клетке-хозяине. GFP также должен был служить индикатором правильного клонирования амплифицированной ДНК ORF. Однако он был разработан для удаления ORF после удаления GFP путем расщепления ферментом Not I с последующим самолигированием. Окончательная структура клонированной ORF после удаления GFP показана на фиг. 4. Клоны, которые имеют сайт (ы) рестрикции Not I в пределах ORF, могут быть получены отдельно с использованием частичного переваривания ферментом Not I.

Рисунок 4

Удаление фрагмента GFP путем расщепления Not I. Каждый клон ORF имеет два сайта Not I, один в области С-концевого спейсера (в пределах Sfi I # 2) и область непосредственно рядом с кодоном терминации гена GFP. Таким образом, GFP может быть удален путем переваривания Not I с последующим самолигированием.

Рисунок 4

Удаление фрагмента GFP путем расщепления Not I.Каждый клон ORF имеет два сайта Not I, один в области С-концевого спейсера (в пределах Sfi I # 2) и область непосредственно рядом с кодоном терминации гена GFP. Таким образом, GFP может быть удален путем переваривания Not I с последующим самолигированием.

3.2. Клонирование в pCA24N

Число ORF, использованных в качестве исходного целевого клонирования, составляло 4276, исключая ORF, закодированные элементами IS. Большинство из них (4267 из 4276 ORF) были успешно клонированы в pCA24N в рамке и в правильной ориентации: 3 из 9 неудачных ORF, yhcQ , yibP и aidB , вероятно, могли быть клонированы только в противоположном направлении. потому что даже небольшая утечка экспрессии из промотора P _{T5- lac} или вышележащей области токсична для клетки-хозяина.Оставшиеся шесть ORF, eaeH (7104 п.н.), yheB (2694 п.н.), yhiH (2685 п.н.), yagF (1968 п.н.), ydbD (2313 п.н.) и btuB (1845 п.н. ), не удалось амплифицировать с помощью реакции ПЦР отчасти из-за их длины для амплификации. Сообщалось, что мРНК btuB образует сложную структуру для контроля связывания с рибосомой и ее трансляции. 29 Это может помешать амплификации с помощью реакции ПЦР.

Очищенные ПЦР-амплифицированные фрагменты затем лигировали в сайт StuI вектора pCA24N.После инкубации в течение ночи при 37 ° C восемь колоний отбирали для каждой ORF и суспендировали в 1 мл свежей среды LB в 96 форматированных глубоких лунках, а также наносили штрихами на планшеты с 1 мМ IPTG, содержащие LB, при 37 ° C для проверки в рамке. клонирование путем наблюдения за ростом и флуоресценцией GFP при избыточном производстве слитого белка GFP, кодируемого каждой ORF. После инкубации в течение ночи при 37 ° C плазмидную ДНК экстрагировали и очищали с использованием набора для очистки ДНК Multi Screen, расщепляли рестрикционными ферментами Sfi I или Bgl I и анализировали электрофорезом в агарозном геле.Были выбраны четыре независимых клона, которые имеют ожидаемые структуры, и сохранены в виде смеси ДНК, чтобы минимизировать потерю внутренней генетической информации во время амплификации ПЦР. Границы сайтов клонирования подтверждали секвенированием.

3.3. Подавление роста индукцией IPTG

Чтобы исследовать влияние избыточного предложения продуктов целевого гена, мы индуцировали экспрессию ORF путем выращивания участков клеток на агаровой среде LB с добавлением или без 1 мМ IPTG при 37 ° C.Из 4269 протестированных ORF 3301 ORF показали некоторые эффекты ингибирования роста за счет индукции IPTG (фиг. 5). Из этих ORF 2149 ORF показали серьезные дефекты роста: было предсказано, что 1158 ORF имеют мембранный домен и являются мембранными белками. Из 1158 вероятных мембранных белков 1032 ORF показали серьезные дефекты роста при избыточном продуцировании.

Рисунок 5

Влияние на рост и флуоресценцию GFP за счет индукции IPTG. Эффекты роста при индукции 1 мМ IPTG на чашке с агаром LB при 37 ° C были разделены на три категории.Цифры представляют отношение каждой из классифицированных ORF к общему количеству ORF E. coli .

Рисунок 5

Влияние индукции IPTG на рост и флуоресценцию GFP. Эффекты роста при индукции 1 мМ IPTG на чашке с агаром LB при 37 ° C были разделены на три категории. Цифры представляют собой отношение каждой из классифицированных ORF к общему количеству ORF E. coli .

3.4. Использование клонов ORF

Создание микрочипа ДНК

Во-первых, мы попытались сконструировать микроматрицу кДНК, используя клоны ORF в качестве ДНК-матриц для амплификации ПЦР.Эти клоны не только функционируют в качестве матриц для ПЦР-амплификации с помощью одного набора общих праймеров олиго-ДНК для каждой целевой рамки считывания, но также, как обнаружено, служат в качестве подходящего источника для матрицы ДНК и обеспечивают стабильный запас фрагмента ДНК. E.coli ДНК-микрочип теперь коммерчески доступен от TAKARA BIO, Inc. Приложения, использующие эти микроматрицы, уже опубликованы. 30–34

Производство очищенного протеина

Настоящий вектор был разработан как эффективный вектор экспрессии, и белковый продукт каждого клона может быть легко индуцирован IPTG в определенном количестве и очищен с использованием колонки Ni- или Co-NTA (рис.6). Некоторые белки, особенно большинство мембранных белков, трудно очистить этим методом. Немногочисленные цитозольные белки показали аналогичные трудности при очистке. Одна возможность состоит в том, что His-tag не может функционировать из-за N-концевой 3D-структуры. Также следует учитывать белки His-tag, присоединенные к его C-концу. Эти очищенные белки также являются хорошим источником для дальнейшего анализа, такого как биохимия белков, кристаллография и антигены для производства антител. Кроме того, анализ совместно очищенных белков с клонированной ORF, меченной His, может выявить кандидатов на взаимодействие белков.Этот анализ с использованием масс-спектрометрии для эффективной идентификации взаимодействующих белков в настоящее время проводится систематически.

Рисунок 6

Очистка белка с использованием колонки Ni-NTA после индукции IPTG. Плазмиды, используемые для сверхэкспрессии белков, меченных гистидином, были из библиотеки ASKA. Из 3 мл культуры, индуцированной добавлением 0,1 мМ IPTG в течение 2 ч, His-меченные белки очищали на колонке Ni-NTA. Все элюированные белки анализировали с помощью SDS-PAGE и визуализировали с помощью кумасси бриллиантового синего.Некоторые белки (CodB, SucC и SucD) практически не очищались этим методом.

Рисунок 6

Очистка белка с использованием колонки Ni-NTA после индукции IPTG. Плазмиды, используемые для сверхэкспрессии белков, меченных гистидином, были из библиотеки ASKA. Из 3 мл культуры, индуцированной добавлением 0,1 мМ IPTG в течение 2 ч, His-меченные белки очищали на колонке Ni-NTA. Все элюированные белки анализировали с помощью SDS-PAGE и визуализировали с помощью кумасси бриллиантового синего. Некоторые белки (CodB, SucC и SucD) практически не очищались этим методом.

Локализация белка определяется по флуоресценции GFP

Локализация белка, несомненно, является одной из важных сведений о белковом продукте для понимания его функции. Однако при индуцировании добавлением IPTG 62% всех клонов ORF показали ингибирование роста клетки-хозяина. И в некоторых случаях индукция IPTG может привести к образованию тельца включения. Чтобы избежать этих искусственных эффектов, клетки выращивали без IPTG. вектор pCA24N имеет lacI ^q для строгого подавления экспрессии промотора P _{T5- lac} без условий роста IPTG; однако очень небольшая часть клеток показала флуоресценцию от GFP, вероятно, из-за неплотной экспрессии.После пилотных испытаний с использованием клонов, известных своей клеточной локализацией, этот анализ был проведен на систематической стадии (Ники, Х., личное сообщение и любезно предоставленные изображения, рис. 7).

Рисунок 7

Изображение флуоресценции GFP клетки. Эти изображения клеток, имеющих ген ftsZ и codB наших клонов, были получены камерой CCD без какой-либо индукции путем добавления IPTG. Флуоресценция GFP возникает из-за утечки транскрипции с промотора.Результат согласуется с предыдущим наблюдением. 43 Фотографии были любезно предоставлены доктором Ники, Национальный институт генетики, Мисима, Япония.

Рисунок 7

Изображение флуоресценции GFP клетки. Эти изображения клеток, имеющих ген ftsZ и codB наших клонов, были получены камерой CCD без какой-либо индукции путем добавления IPTG. Флуоресценция GFP возникает из-за утечки транскрипции с промотора. Результат согласуется с предыдущим наблюдением.43 Фотографии были любезно предоставлены доктором Ники, Национальный институт генетики, Мисима, Япония.

Функциональный анализ ORF

Делеционная мутация целевого гена может выявить его физиологическую функцию за счет потери функции, но клон также может дать нам много предположений о его функции из-за избыточного предложения продукта целевого гена. Приложения с использованием клонов уже публиковались в других местах. 35–38

3.5. Распространение клонов

Клоны

находятся в свободном доступе для использования в академических целях с соглашением о передаче материалов и планируется распространять с нескольких сайтов в Японии и других странах.Первоначально эти клоны доступны в Институте науки и технологий Нара, и запросы принимаются через нашу веб-страницу (веб-страница авторов).

3.6. Контроль качества и сопутствующая информация

Исправить предсказание ORF не только для функциональной аннотации, но и для кодирующей области на основе последовательности генома — сложная проблема, и она всегда находится на стадии развития. Чтобы улучшить качество нашей библиотеки клонов плазмид, мы продолжаем попытки воссоздать целевые клоны ORF на основе последнего предсказания ORF.

В ноябре 2003 года аннотация генов E. coli международным консорциумом была начата в соответствии с корректировкой последовательности генома E. coli японской группой, организованной Хориучи (Hayashi, K., Morooka, N., Otsubo, E. et al., Рукопись готовится). Недавно консорциум установил более точное предсказание и аннотацию ORF в качестве первой версии (Riley, M. et al., Рукопись готовится). Общее количество ORF или фрагментов ORF E.coli K-12 W3110 составляет 4364. Из 4364 ORF 77 были предсказаны как псевдогены, вызванные вставкой IS или мутацией сдвига рамки считывания. За исключением этих псевдогенов и IS или связанных с фагом ORF, необходимо создать 3986 вновь назначенных ORF в виде плазмидных клонов в качестве библиотеки ASKA. Согласно этой информации, мы обнаружили в нашей библиотеке около 900 плазмидных клонов, которые требуются для незначительной модификации, главным образом на их стартовых сайтах, и почти все они уже модифицированы и готовы к использованию. В то же время мы попытались прочитать всю последовательность клонированного фрагмента, чтобы проверить ошибку ПЦР и сохранить один правильный клон, если он доступен.

Как упоминалось в разделе «Материалы и методы», предыдущие запасы клонов представляют собой смесь от нескольких до четырех независимых кандидатов каждой целевой рамки считывания, структура которых была подтверждена рестрикционным ферментом и секвенированием с обеих сторон. Некоторые из них могут иметь ошибки ПЦР, и мы продолжим усилия по устранению таких ошибок путем секвенирования и повторного клонирования. Самая свежая информация о библиотеке АСКА доступна на нашей веб-странице (веб-страница авторов).

Эта работа была поддержана грантом на научные исследования в приоритетных областях Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии, грантом CREST, JST (Япония, наука и технологии) и частично от NEDO (Организация по развитию новой энергии и промышленных технологий) и Фонда Инамори.Мы благодарим Hironori Niki (Национальный институт генетики) за предоставленные фотографии локализации белка. Мы также благодарим Такаши Юру, Кацуми Исоно (Университет Кобе) и Такаши Хориучи (Институт фундаментальной биологии) за подготовку рукописи. Средства на оплату публикации этой статьи в открытом доступе были предоставлены NEDO.

Список литературы

1« и др.

Beyond 100 genomes

Genome Biol.

2003

, т.

стр.

402

2« и др.

Полная последовательность генома грамположительной бактерии Bacillus subtilis

Nature

1997

, vol.

390

(стр.

249

—

256

) 3« и др.

Полная последовательность генома Escherichia coli K-12

Science

1997

, vol.

277

(стр.

1453

—

1474

) 4« и др.

Обзор генома дрожжей

Nature

1997

, vol.

387

(стр.

—

) 5« и др.

Анализ области гомологии кластера 103 т.п.н. с левого конца Saccharomyces cerevisiae хромосомы I

Геном

1997

, vol.

(стр.

151

—

164

) 6,.

Функциональная геномика и эволюция ферментов. Гомологические и аналогичные ферменты, закодированные в микробных геномах

Genetica

1999

, vol.

106

(стр.

159

—

170

) 7,.

Генные продукты Escherichia coli : сравнение последовательностей и общие предки

Mol. Биол. Evol.

1995

, т.

(стр.

980

—

987

) 8,,.

Геномный взгляд на семейства белков

Science

1997

, vol.

278

(стр.

631

—

637

) 9,.

Эволюция белка через последовательностей белка Escherichia coli : введение понятия структурного сегмента гомологии, модуль

J.Мол. Биол.

1997

, т.

268

(стр.

857

—

868

) 10,.

Предложение о механизме эволюции генома Escherichia coli

Proc. Natl Acad. Sci. США

1975

, т.

(стр.

1354

—

1358

) 11« и др.

Использование кластеров генов для вывода функционального сцепления

Proc. Natl Acad. Sci. США

1999

, т.

(стр.

2896

—

2901

) 12.

MBGD: база данных микробного генома для сравнительного анализа

Nucleic Acids Res.

2003

, т.

(стр.

—

) 13.

Функции продуктов гена Escherichia coli

Microbiol. Ред.

1993

, т.

(стр.

862

—

952

) 14« и др.

Глобальный мутагенез транспозонов и минимальный геном Mycoplasma

Science

1999

, vol.

286

(стр.

2165

—

2169

) 15« и др.

Essential Bacillus subtilis гены

Proc. Natl Acad. Sci. США

2003

, т.

100

(стр.

4678

—

4683

) 16« и др.

Функциональная характеристика генома S. cerevisiae путем делеции гена и параллельного анализа

Science

1999

, vol.

285

(стр.

901

—

906

) 17,.

Масштабный мутагенез: генетика дрожжей в эпоху генома

Curr. Opin. Biotechnol.

2001

, т.

(стр.

—

) 18,,, et al.

Корреляция подмножества плазмид pLC с физической картой Escherichia coli K-12

Microbiol. Ред.

1992

, т.

(стр.

137

—

151

) 19,,, et al.

Построение упорядоченной коллекции космид Escherichia coli K-12 W3110 хромосомы

J.Бактериол.

1989

, т.

171

(стр.

1214

—

1218

) 20,,.

Завершение подробной рестрикционной карты генома E. coli путем выделения перекрывающихся космидных клонов

Nucleic Acids Res.

1989

, т.

(стр.

5901

—

5912

) 21,.

Космидная карта штамма E. coli BHB2600 по сравнению с картой штамма W3110

Nucleic Acids Res.

1989

, т.

(стр.

5057

—

5069

) 22,,.

Физическая карта всей хромосомы E. coli : применение новой стратегии быстрого анализа и сортировки большой геномной библиотеки

Cell

1987

, vol.

(стр.

495

—

508

) 23,.

Картирование с использованием энциклопедий генов

Nature

1987

, vol.

325

(стр.

831

—

832

) 24.

Лунные белки

Trends Biochem. Sci.

1999

, т.

(стр.

—

) 25« и др.

Длинная и точная ПЦР со смесью ДНК-полимеразы KOD и ее мутантного фермента, дефицитного по экзонуклеазе.

J. Biotechnol.

2001

, т.

(стр.

141

—

149

) 26« и др.

Характеристика ДНК-полимеразы из Pyrococcus sp .штамм KOD1 и его применение для ПЦР

заявл. Environ. Microbiol.

1997

, т.

(стр.

4504

—

4510

) 27,,. ,

Molecular Cloning: A Laboratory Manual

1998

2nd Ed.

Колд-Спринг-Харбор, Нью-Йорк

Лаборатория Колд-Спринг-Харбор

28,,.

Новый мутант зеленого флуоресцентного белка с повышенной чувствительностью для микроанализа при возбуждении 488 нм

Biochem. Биофиз.Res. Commun.

1999

, т.

264

(стр.

556

—

560

) 29,,, et al.

Генетический контроль с помощью мРНК, связывающей метаболит

Chem. Биол.

2002

, т.

стр.

1043

30« и др.

Транскриптомный анализ всех двухкомпонентных мутантов регуляторной системы Escherichia coli K-12

Mol. Microbiol.

2002

, т.

(стр.

281

—

291

) 31,,, et al.

Полногеномный анализ опосредованного дезоксиаденозинметилтрансферазой контроля экспрессии генов в Escherichia coli

Mol. Microbiol.

2002

, т.

(стр.

673

—

695

) 32« и др.

HemK, класс протеинметилтрансфераз, сходных с ДНК-метилтрансферазами, метилирует факторы высвобождения полипептидной цепи, а нокаут hemK вызывает дефекты терминации трансляции

Proc.Natl Acad. Sci. США

2002

, т.

(стр.

1473

—

1478

) 33« и др.

Амплификация горячих сегментов ДНК в Escherichia coli

Мол. Microbiol.

2002

, т.

(стр.

1575

—

1588

) 34« и др.

Идентификация и молекулярная характеристика стимула Mg ²⁺ Escherichia coli

J. Bacteriol.

2003

, т.

185

(стр.

3696

—

3702

) 35« и др.

Молекулярная характеристика последовательностей длинных прямых повторов (LDR), экспрессирующих стабильную мРНК, кодирующую 35-аминокислотный убивающий клетки пептид и цис-кодируемую малую антисмысловую РНК в Escherichia coli

Mol. Microbiol.

2002

, т.

(стр.

333

—

349

) 36,,, et al.

Идентификация и функциональный анализ Escherichia coli десульфгидразы цистеина

Прил.Environ. Microbiol.

2005

, т.

(стр.

4149

—

4152

) 37,,, et al.

Идентификация двух отсутствующих бактериальных генов, участвующих в спасении тиамина: тиаминпирофосфокиназа и тиаминкиназа

J. Bacteriol.

2004

, т.

186

(стр.

3660

—

3662

) 38« и др.

Общие ферментативные скрининги идентифицируют три новых нуклеотидазы в Escherichia coli .Биохимическая характеристика SurE, YfbR и YjjG

J. Biol. Chem.

2004

, т.

279

(стр.

54687

—

54694

) 39« и др.

Новая мутация, усиливающая флуоресценцию зеленого флуоресцентного белка при высоких температурах

Biochem. Биофиз. Res. Commun.

1997

, т.

232

(стр.

—

) 40« и др.

Плазмидные векторы с высоким и низким числом копий для lacZ альфа-комплементации и селекции устойчивости к хлорамфениколу или канамицину

Gene

1987

, vol.

(стр.

—

) 41,.

Одностадийная очистка полипептидов, экспрессируемых в Escherichia coli в виде слияния с глутатион-S-трансферазой

Gene

1988

, vol.

(стр.

—

) 42,,.

Использование транспозонов с акцентом на Tn10

Методы Enzymol.

1991

, т.

204

(стр.

139

—

180

) 43,,.

Совместная локализация белков деления клеток FtsZ и FtsA в структурах цитоскелета в живых клетках Escherichia coli с использованием зеленого флуоресцентного белка

Proc. Natl Acad. Sci. США

1996

, т.

(стр.

12998

—

13003

)

Заметки автора

Онлайн-версия этой статьи опубликована в рамках модели открытого доступа.Пользователи имеют право использовать, воспроизводить, распространять или демонстрировать версию этой статьи в открытом доступе в некоммерческих целях при условии, что: исходное авторство правильно и полностью указано; Журнал и Издательство Оксфордского университета указываются как место первоначальной публикации с указанием правильных сведений о цитировании; если статья впоследствии воспроизводится или распространяется не полностью, а только частично или как производная работа, это должно быть четко указано. По вопросам коммерческого повторного использования обращайтесь в журналы[email protected]

Полный комплект буквиц для пингвинов: 9780147517562

О комплекте буквиц для пингвинов

Соберите полный набор буквиц «Пингвин» от А до Я: уникальная серия из двадцати шести обложек в твердом переплете с изображением суперзвезды Джессики Хиш

Все начинается с буквы. Влюбитесь в буквицы Penguin Drop Caps, новую серию из двадцати шести коллекционных и достойных подарков изданий в твердом переплете, каждое с обложкой, демонстрирующей великолепно иллюстрированную букву алфавита суперзвезды шрифтового дизайнера Джессики Хиш, чьи работы появлялись повсюду от Tiffany И Ко.к фильму Уэса Андерсона Moonrise Kingdom к собственным бестселлерам Penguin Принято и Правила вежливости . Совместная работа Джессики Хиш и арт-директора Penguin Пола Бакли, дизайн серии включает в себя футляры для бумаги поверх картона с тиснением фольгой в радужном спектре на всех двадцати шести книжных корешках и декоративное пятно на всех трех краях бумаги. Буквицы Penguin Drop Caps дебютируют с буквой «А» за фильм «Гордость и предубеждение» Джейн Остин , «В» за модель Джейн Эйр Шарлотты Бронте и «С» за модель My Ántonia Уиллы Катер, а также продолжают классические произведения от Penguin. .

В этот набор входят все двадцать шесть буквиц Penguin: Pride and Prejudice Джейн Остин, Джейн Эйр Шарлотты Бронте, My Ántonia Виллы Катер, Great Expectations Чарльза Диккенса, Миддлмарч Джордж Элиот, Мадам Бовари Гюстав Флобер, Повелитель мух Уильям Голдинг, Сиддхарта Герман Гессе, Художник парящего мира Кадзуо Исигуро, Портрет художника в образе Молодой человек Джеймса Джойса, Тайная жизнь пчел Сью Монк Кидд, Носитель языка Чанг-Рэ Ли, Моби-Дик Германа Мелвилла, Пять детей и это Э.Несбит, Баттерфилд 8 Джона О’Хара, Путь Суанна Марселя Пруста, Тайна греческого гроба Эллери Куин, Гарун и Море историй Салмана Рушди, Консервный ряд Джона Стейнбека, Клуб радости и удачи Эми Тан, Кристин Лаврансдаттер: Венок Сигрид Ундсет, Кандид Вольтера, Листья травы и избранные стихи и проза Уолта Уитмена, Небесная Бурия л Xinran, Когда ты старый: Ранние стихи и сказки У.

Как узнать комплектацию автомобиля по VIN бесплатно

Какая информация содержится в ВИН-номере

Какую полезную информацию содержит VIN-номер

Зачем это нужно

Комплектация авто по ВИН коду бесплатно

Как узнать комплектацию автомобиля по vin бесплатно и с гарантией

Читайте также:

Как узнать комплектацию автомобиля » AutoKontact

Основной способ, как узнать какая комплектация у машины

Как расшифровать данные vin-кода.

Как проверить комплектацию авто по VIN (ВИН) коду

Как узнать комплектацию автомобиля по VIN-коду?

Как знание комплектации помогает в разоблачении мошеннических схем?

VIN-код и кузовной серийный номер: отличия

Что именно можно определить с помощью ВИНа?

Как пробить комплектацию через онлайн-сервис «АвтоИстория»?

Как узнать комплектацию по VIN (ВИН) коду

VIN код — где найти и как читать

Как пробить ВИН код

Расшифровка комплектации Audi по ВИН

Особенности VIN на автомобилях Nissan

Читаем VIN на кузове Mercedes-Benz

Комплектация BMW по коду кузова

Какая польза от чтения VIN

Комплектация по ВИН-коду. Как узнать комплектацию по VIN-коду

Комплектация по ВИН

Как узнать комплектацию автомобиля?

Комплектация по VIN

Страна сборки по ВИН-коду

Как узнать комплектацию компьютера? Советы новичку

Как посмотреть комплектацию компьютера?

Обзор комплектации компьютера через операционную систему

Обзор комплектации компьютера через программы

Вместо послесловия

Как узнать комплектацию автомобиля по вин коду

Где же он этот ВИН код?

Как прочитать ВИН код?

Специализированные интернет-сервисы

Полная настройка цифрового экзамена — студенты AP

Измерение полного набора транспортных свойств концентрированного раствора твердого полимерного электролита

WASFA (Вашингтонское заявление на государственную финансовую помощь)

Государственная финансовая помощь для студентов без документов и других избранных абитуриентов

Приложение

Какой год подачи заявления WASFA мне следует заполнять?

Новый пользователь

Вернувшийся пользователь

Вы студент-резидент WASFA?

Ресурсы приложений

Заявление о конфиденциальности WASFA

Теория множеств | Введение в математику колледжа

Основы

Набор

Пример 1

ответы

Обозначение

Пример 2

Подмножество

Пример 3

Пример 4

Попробовать

Соединение, пересечение и дополнение

Союз, пересечение и дополнение

Пример 5

ответы

Попробовать

Универсальный набор

Пример 6

Пример 7

Пример 8

Решения

Диаграммы Венна

Диаграмма Венна

Пример 9

Пример 10

Пример 11

Попробовать

Мощность

Мощность

Пример 12

ответов