Датчик кислорода на гранту: Доступ с вашего IP-адреса временно ограничен — Авито — Запчасти Владивосток | Автозапчасти Владивосток

Содержание

Замена датчика кислорода Лада Гранта

На чтение 3 мин. Просмотров 27.2k. Опубликовано 05.06.2015 Обновлено 26.04.2020

На автомобиле Лада Гранта установлены два датчика кислорода – управляющий и диагностический. Первый датчик отвечает за качество и количество смеси в камере сгорания, второй осуществляет контроль каталитического нейтрализатора.

Управляющий датчик кислорода на Гранте расположен в верхней части коллектора, диагностический за катализатором.

Описание диагностического и управляющего датчика кислорода

Управляющий датчик кислорода Лада Гранта принцип работы

Кислород, содержащийся в отработавших газах, реагирует с датчиком кислорода, создавая разность потенциалов на выходе. Она изменяется приблизительно от 0,1 В (высокое содержание кислорода – бедная смесь) до 0,9 В (мало кислорода – богатая смесь).

Внимание! Для нормального функционирования датчика, ему необходима температура не ниже 360°С.

Специально для того, чтобы датчик быстро набирал необходимую температуру сразу после пуска двигателя, в него встроен нагревательный элемент. Таким образом датчик контролирует богатую и бедную смесь в камере сгорания.

Каталожный номер управляющего датчика 21074-3850010-00

Диагностический датчик кислорода Гранта принцип работы

Этот датчик полностью взаимозаменяем с управляющим, работает по аналогичной с ним схеме. Но, отличия его в том, что он посылает сигнал об отработавших газах после нейтрализатора. Если нейтрализатор работает нормально, показания диагностического датчика будут значительно отличаться от значений управляющего датчика.

Каталожный номер диагностического датчика 21074-3850010-00

Признаки и неисправности датчиков кислорода на Гранте

Основных неисправностей датчиков может быть всего несколько:

Химический компонент неисправен, что приводит к увеличенному отклику датчика и периода его срабатывания
Электрическая неисправность датчика например обрыв цепи или механическое повреждение

Признаки неисправности датчиков кислорода

нестабильная работа двигателя
снижение мощности мотора
увеличенный расход топлива

Прежде чем заменить датчик(ки) на новые, необходимо проверить работоспособность ваших старых. Сделать это можно при помощи мультиметра.

Как проверить датчик кислорода самостоятельно

Проверять датчики будем с помощью мультиметра. Для удобства желательно загнать автомобиль на эстакаду или смотровую яму.

Аккуратно отсоединяем колодку проводов от датчика нажав на пружинный фиксатор. Далее необходимо включить зажигание.

На колодке проводов указана нумерация выходов. Нам необходимо проверить питания нагревательного элемента на выводе «В»

Далее минусовой щуп вольтметра подсоединяем к массе двигателя

Проверяемое нами напряжение должно быть не менее 12В. Если оно меньше или его совсем нет значит неисправен либо ЭБУ, разряжен аккумулятор или электрическая цепь.

Проверяем исправность цепи питания датчика и ЭБУ

Минусовой щуп вольтметра подсоединяем к к выводу «С» колодки датчика

Второй щуп к значению «А» и замеряем тем самым напряжение между двумя выводами. Напряжение должно быть 0,45 В. Если напряжение не поступает на колодку или оно отличается более чем на 0,02 В, значит, неисправна цепь питания или электронный блок управления.

Самостоятельная замена датчика

Если после проверки мы убедились, что датчик неисправен, его следует заменить. Для этого нужно обратиться либо в автосервис, или сделать это самостоятельно.

Для замены датчика нам потребуется всего лишь ключ на 22мм.

Отсоединяем минусовую клемму АКБ
Аккуратно вытаскиваем колодку проводов из датчика
Ключем на 22мм аккуратно выкручиваем старый датчик и устанавливаем новый.

Как видим все просто и легко. Основной проблемой на начальном этапе является определение неисправности датчика (лямбда зонд). На самом ли деле причина в нем, после того как убедимся в его неисправности можно смело менять на новый.

Lada Kalina как заменить Лямбда Зонд 8 клапанная, видео.

https://www.youtube.com/watch?v=0WNge9o5ii0

Кислородный датчик: устройство, назначение, диагностика

Сомнительная заправка, плохой бензин, «чек» на панели — стандартный и быстрый путь к замене кислородного датчика. Про лямбда-зонд слышали многие автомобилисты, но мало кто разбирался, за что именно он отвечает и почему так легко выходит из строя. Рассказываем про датчик кислорода — «обоняние» двигателя.

Лямбда и стехиометрия двигателя

Название датчика происходит от греческой буквы λ (лямбда), которая обозначает коэффициент избытка воздуха в топливно-воздушной смеси. Для полного сгорания смеси соотношение воздуха с топливом должно быть 14,7:1 (λ=1). Такой состав топливно-воздушной смеси называют стехиометрическим — идеальным с точки зрения химической реакции: топливо и кислород в воздухе будут полностью израсходованы в процессе горения. При этом двигатель произведёт минимум токсичных выбросов, а соотношение мощности и расхода топлива будет оптимальным.

Если лямбда будет <1 (недостаток воздуха), смесь станет обогащённой; при лямбде >1 (избыток воздуха) смесь называют обеднённой. Чересчур богатая смесь — это повышенный расход топлива и более токсичный выхлоп, а слишком бедная смесь грозит потерей мощности и нестабильной работой двигателя.

Зависимость мощности и расхода топлива от состава смеси

Из графика видно, что при λ=1 мощность двигателя не пиковая, а расход топлива не минимален — это лишь оптимальный баланс между ними. Наибольшую мощность мотор развивает на слегка обогащённой смеси, но расход топлива при этом возрастает. А максимальная топливная эффективность достигается на слегка обеднённой смеси, но ценой падения мощности. Поэтому задача ЭБУ (электронного блока управления) двигателя — корректировать топливно-воздушную смесь исходя из ситуации: обогащать её при холодном пуске или резком ускорении, и обеднять при равномерном движении, добиваясь оптимальной работы мотора во всех режимах. Для этого блок управления ориентируется на показания датчика кислорода.

Зачем нужен кислородный датчик

Датчиков в современном двигателе великое множество. С помощью различных сенсоров ЭБУ замеряет температуру забортного воздуха и его поток, «видит» положение дроссельной заслонки, отслеживает детонацию и положение коленвала — словом, внимательно следит за воздухом «на входе» и показателями работы мотора, регулируя подачу топлива для создания оптимальной смеси в цилиндрах.

Схема лямбда-коррекции двигателя

Лямбда-зонд показывает, что же получилось «на выходе», замеряя количество кислорода в выхлопных газах. Другими словами, кислородный датчик определяет, оптимально ли работает мотор, соответствуют ли расчёты ЭБУ реальной картине и нужно ли вносить в них поправки. Основываясь на данных с лямбда-зонда, ЭБУ вносит соответствующие коррекции в работу двигателя и подготовку топливно-воздушной смеси.

Где находится кислородный датчик

Датчик кислорода установлен в выпускном коллекторе или приёмной трубе глушителя двигателя, замеряя, сколько несгоревшего кислорода находится в выхлопных газах. На многих автомобилях есть ещё один лямбда-зонд, расположенный после каталитического нейтрализатора выхлопа — для контроля его работы.

Если у двигателя две головки блока (V-образники, «оппозитники»), то удваивается количество выпускных коллекторов и катализаторов, а значит и лямбда-зондов — у современной машины может быть и 4 кислородных датчика.

Устройство кислородного датчика

Классический лямбда-зонд порогового типа — узкополосный — работает по принципу гальванического элемента. Внутри него находится твёрдый электролит — керамика из диоксида циркония, поэтому такие датчики часто называют циркониевыми. Поверх керамики напылены токопроводящие пористые электроды из платины. Будучи погружённым в выхлопные газы, датчик реагирует на разницу между уровнем кислорода в них и в атмосферном воздухе, вырабатывая на выходе напряжение, которое считывает ЭБУ.

Циркониевый элемент лямбда-зонда приобретает проводимость и начинает работать только после прогрева до температуры 300 °C. До этого ЭБУ двигателя действует «вслепую» согласно топливной карте, без обратной связи от кислородного датчика, что повышает расход топлива при прогреве двигателя и количество вредных выбросов. Чтобы быстрее задействовать лямбда-зонд, ему добавляют принудительный электрический подогрев. Кислородные датчики с подогревом внешне отличаются увеличенным количеством проводов: у них 3–4 жилы против 1–2 у обычных датчиков.

В названии узкополосного датчика кроется его недостаток — он способен замерять количество кислорода в выхлопе в достаточно узком диапазоне. ЭБУ может корректировать смесь по его показаниям только в некоторых режимах работы мотора (холостой ход, движение с постоянной скоростью), что не отвечает современным требованиям по экономичности и экологичности двигателей. Для более точных замеров в широком диапазоне используют широкополосный лямбда-зонд (A/F-сенсор), который также называют датчиком соотношения «воздух-топливо» (Air/Fuel Sensor). Обычно к нему подходят 5–6 проводов, хотя бывают и исключения.

Внешне «широкополосник» похож на обычный датчик кислорода, но внутри есть отличия. Благодаря специальным накачивающим ячейкам эталонный лямбда-коэффициент газового содержимого датчика всегда равен 1, и генерируемое им напряжение постоянно. А вот ток меняется в зависимости от количества кислорода в выхлопных газах, и ЭБУ двигателя считывает его в реальном времени. Это позволяет электронике быстрее и точнее корректировать смесь, добиваясь её полного сгорания в цилиндрах.

Почему до сих пор производят узкополосные датчики? Во-первых, для старых автомобилей, где A/F-сенсоры не применялись. Во-вторых, из-за особенностей «широкополосника» его нельзя устанавливать после катализатора, где он быстро выходит из строя. А контролировать работу катализатора как-то надо. Поэтому в современных двигателях ставят два лямбда-зонда разного типа: широкополосный (управляющий) — в районе выпускного коллектора, а узкополосный (диагностический) — после катализатора.

Причины и признаки неисправности лямбда-зонда

Основная причина поломок кислородных датчиков — некачественный бензин: свинец и ферроценовые присадки оседают на чувствительном элементе датчика, выводя его из строя. На состояние лямбда-зонда влияет и нестабильная работа двигателя: при пропусках зажигания от старых свечей или пробитых катушек несгоревшая смесь попадает в выхлопную систему, где догорает, выжигая и катализатор, и датчики кислорода. Приговорить датчик также может попадание в цилиндры антифриза или масла.

Самый очевидный признак неисправности лямбда-зонда — индикатор Check Engine на приборной панели. Считав код ошибки с помощью сканера или самодиагностики, можно проверить, какой именно датчик вышел из строя, если их несколько. Иногда всё дело в повреждённой проводке датчика — с проверки цепи и стоит начать поиск поломки.

Но далеко не всегда проблемный лямбда-зонд зажигает «Чек»: иногда он не ломается полностью, а медленно умирает, давая при этом ложные показания, из-за чего ЭБУ двигателя неверно корректирует состав смеси. В этом случае нужно ориентироваться на косвенные признаки — ухудшение работы двигателя.

Проблемы с датчиком кислорода нарушают всю систему обратной связи и лямбда-коррекции, вызывая целый букет неисправностей. Прежде всего, это увеличение расхода топлива и токсичности выхлопа, снижение мощности и нестабильный холостой ход. Если вовремя не заменить лямбда-зонд, следом выйдет из строя каталитический нейтрализатор, осыпавшись из-за перегрева от обогащённой смеси.

Универсальные кислородные датчики

Цена на оригинальные датчики кислорода вряд ли обрадует автомобилистов, но все лямбда-зонды работают по единому принципу, что позволяет без труда подобрать замену. Главное, чтобы соответствовал типа датчика (широкополосный/узкополосный), количество проводов и резьбовая часть. В продаже есть универсальные кислородные датчики без разъёма, которые можно использовать на десятках моделей автомобилей — подобрать и купить лямбда-зонд не составляет проблемы.

Чтобы избежать проблем с кислородными датчиками, следите за состоянием двигателя, заправляйтесь качественным топливом и регулярно выполняйте компьютерную диагностику, которая позволит выявить неисправности на ранней стадии.

Датчик кислорода на Лада Гранта: где находится, замена

На автомобилях модели Лала Гранта предустановлено два датчика концентрации кислорода (далее — ДКК). Первый управляющий, второй диагностический.

Управляющий призван считывать количественный состав кислорода в выпускных газах с камер сгорания, диагностический – сканирует выхлопные газы, следующие на выходе с каталитического наполнителя.

В ходе систематической эксплуатации автомобиля, некачественного топлива, нарушения регламента по обслуживанию контролеры выходят из строя. Процесс замены своими руками вовсе не сложный, но требует внимательности со стороны ремонтника.

Датчик кислорода на Лада Гранта: оригинал, аналоги, цена, артикулы

Каталожный артикул / маркировка	Цена в рублях
Управляющий 21074-3850010-00 (8 клапанная Лада)	От 2400
Диагностический 21074-3850010-00 (8 клапанная Лада)	От 2400
NGK 95801	От 1900 — 2100
BOSCH 0 258 006537	От 1900 — 2100
ERA 570023	От 1900 — 2100
FENOX SD10100O7	От 1900 — 2100
BREMI 30223	От 1900 — 2100
DENSO DOX-0150	От 1900 — 2100
STELLOX 20-00028-SX	От 1900 — 2100
PATRON HZ-30301006	От 1900 — 2100
Металлическая проставка	250 — 300
Электронный эмулятор	От 1600
*цены указаны состоянием на май 2019 года

Лямбда зонд (ДКК) предназначен для отслеживания содержания количества кислорода в выхлопных газах. Превышение воздуха в смеси называется «обогащением», а обратный процесс – «обеднением».

Оба фактора негативно отображаются на функциональности мотора. Что приводит к снижению мощности, нестабильной работе на холостом ходу, повышенным расходом топлива.

Где расположен кислородный датчик

Модель Лада Гранта оснащена двумя ДКК: диагностическим и управляющим. Первый находится в корпусе выпускного коллектора, второй – после муфты коллектора.

Доступ к оборудованию для проведения профилактики из-под днища автомобиля, а также, через верх моторного отсека.

Средний ресурс эксплуатации ДКК 80 – 110 тыс. км. в зависимости от соблюдения водителем рекомендаций изготовителя.

Признаки неисправности датчика кислорода на автомобиле Лада Гранта

Признаки во многом схожи с другими поломками, поэтому важно на начальном этапе корректно идентифицировать поломку.

Затрудненный запуск мотора «на холодную», «на горячую»;
Увеличенный расход горючего;
Снижение мощности;
Пассивная динамика разгона;
Работа мотора не в такт;
На приборном щитке сигнализирует индикатор о наличии системных ошибок электронного блока управления;
Из выхлопной трубы слышны периодические прострелы, что указывает на обогащение (обеднение) горючей смеси;
Дым синего, сизого, черного цвета из выхлопной трубы.

При обнаружении одного или нескольких признаков немедленно обратитесь к специалисту СТО для проведения

Причины сокращения ресурса эксплуатации оборудования

Нарушение условий эксплуатации автомобиля, несоблюдение сроков проведения планового технического осмотра;
Заправка машины некачественный горючим;
Покупка с последующей установкой неоригинальных деталей;
Нарушение технологии монтажа;
Брак детали при изготовлении;
Повреждение при аварии, столкновении, ударе;
Некорректная работа прошивки электронного блока управления.

Диагностика контролера своими руками на Лада Гранта

Чтобы проверить оборудование используем мультиметр. Прибор имеется у большинства автомобилистов в гараже. Последовательность действий следующая:

Помещаем машину над смотровой ямой;
Снимаем концевики;
Подсоединяем клеммы мультиметра;
Активируем прибор в положение «Замер сопротивления»;
Анализируем полученные данные.

Если стрелка тяготеет к бесконечности – лямбда зонд исправен, если стрелка опускается в ноль – деталь повреждена. Помните, что контролер неразборный, профилактике не подлежит.

Водителю на заметку!!! Мотористы СТО настоятельно рекомендуют приобретать детали с заводскими каталожными артикулами с целью предотвращения нестабильной работы силового агрегата.

Установка кислородного датчика на Лада Гранта

Подготовительный этап:

Ключ на «17»;
Ветошь;
Дополнительное освещение;
Диагностический и управляющий контролеры;
Мультиметр для замера сопротивления в электрической цепи.

Регламент:

Помещаем машину над смотровым каналом (ямой). При отсутствии используем гидравлический подъемный механизм;
Глушим мотор, открываем капот;
Ожидаем пока выхлопной контур остынет до безопасной температуры, чтобы не повредить кожные покровы кистей рук;
Из-под днища отщелкиваем концевик с клеммами на диагностическом контролере. Выкручиваем его, заменяем новым. Надеваем концевики;
По аналогии проводим замену управляющего контролера.

Замена завершена. Запускаем двигатель, проверка функционала оборудования. При условии соблюдения регламента последующая профилактика через 80 – 85 тыс. км пробега.

Какой датчик кислорода стоит на гранте – АвтоТоп

Снятие датчиков концентрации кислорода

Снимаем датчики для замены и при демонтаже катколлектора системы выпуска отработавших газов.
Работу проводим на холодном двигателе.
Расположенный в верхней части катколлектора датчик закрыт ресивером и впускной трубой двигателя, но демонтировать его можно сверху из моторного отсека. Для наглядности операции показываем при снятых ресивере и впускной трубе.

Расположение управляющего датчика концентрации кислорода:
1 – место соединения колодки жгута проводов датчика с колодкой жгута проводов системы управления двигателем;
2 – пластмассовый держатель жгута проводов датчика;
3 – управляющий датчик концентрации кислорода.
Сжав усики пластмассового держателя жгута проводов датчика, вынимаем держатель из отверстия в теплозащитном экране рулевого механизма.
При выключенном зажигании отжимаем фиксатор колодки жгута проводов системы управления двигателем…

…и отсоединяем колодку от колодки жгутов проводов датчика.

Рожковым ключом «на 22» выворачиваем датчик из резьбового отверстия в катколлекторе.
В процессе эксплуатации датчик может «прикипеть» к катколлектору и тогда, как правило, рожковым ключом отвернуть датчик не удастся – будут срываться грани датчика. В этом случае отвернуть датчик можно накидным ключом «на 22». Чтобы надеть кольцо накидного ключа на шестигранник датчика, можно разобрать колодку жгута проводов датчика, вынув из нее наконечники проводов, или перекусить жгут проводов бокорезами, если датчик подлежит замене.

Вынимаем управляющий датчик концентрации кислорода.
Операции по демонтажу диагностического датчика концентрации кислорода выполняем на смотровой канаве или эстакаде.
Снимаем средний грязезащитный щиток моторного отсека (см. «Снятие грязезащитных щитков моторного отсека»).
Соединение колодки жгута проводов диагностического датчика концентрации кислорода с колодкой жгута проводов системы управления двигателем расположено в моторном отсеке, рядом со щитком передка (над центральной частью рулевого механизма).
Отжав фиксатор колодки жгута проводов системы управления двигателем…

…отсоединяем колодку от колодки жгута проводов диагностического датчика концентрации кислорода.

Рожковым ключом «на 22» выворачиваем датчик из резьбового отверстия в катколлекторе.
Учитывая расположение датчика в труднодоступном месте, отвернуть датчик лучше Z‑образным накидным ключом «на 22» (см. выше).

Вынув резиновый держатель 3 жгута проводов датчика из отверстия 2 в теплозащитном экране рулевого механизма, продеваем через отверстие колодку 1 жгута проводов.

Снимаем диагностический датчик концентрации кислорода.
Устанавливаем управляющий и диагностический датчики концентрации кислорода в обратной последовательности.
Чтобы в процессе эксплуатации датчик не «прикипел» к катколлектору…

…перед установкой датчика наносим на его резьбовую часть тонкий слой противопригарной высокотемпературной присадки на основе графита.

Не допускайте попадания присадки или грязи на колодку проводов датчика и внутрь его через отверстия в наконечнике датчика.
Затягиваем датчики предписанным моментом (см. «Приложения»).

Датчик кислорода или лямбда-зонд в автомобиле Лада Калина или любой другой модели представляет собой устройство, позволяющее корректировать подачу топлива для образованию горючей смеси. Поскольку этот регулятор работает постоянно, он имеет свойство периодически выходить из строя. Об устройстве и диагностике контроллера вы можете узнать из этого материала.

Описание и устройство

Ладовский лямбда-зонд от BOSCH

Для нормальной работы датчика кислорода Лада Гранта устройство должно иметь температуру не ниже 300 градусов. Для этого используется дополнительный тепловой компонент, который начинает работать сразу после запуска силового агрегата. На Калине или любом другом ВАЗе кислородный датчик (КД) может быть отравлен в результате использования этилированного топлива.

Где находится КД в автомобиле Лада Калина или на любом другом авто? Его монтаж осуществляется в выхлопном коллекторе, благодаря чему устройство может все время производить контроль уровня кислорода в отработанных газах при работе ДВС. При необходимости расположенный в выхлопном коллекторе регулятор может подать импульс на блок управления, в результате чего топливная система начнет регулировку воздуха и горючего. Горючая смесь, как известно, нужна для полноценной работы силового агрегата.

Поскольку в ходе эксплуатации на КД возлагаются высокие тепловые нагрузки, он обычно производится из термостойких материалов. Непосредственно сама поверхность устройства покрывается специальным керамическим материалом, а сверху наносится платиновое опыление. Соответственно, это позволяет выдерживать максимальные температуры при работе мотора, вплоть до 350 градусов.

Что касается контроля уровня кислорода для образования горючей смеси, то за это отвечает установленный внутри конструкции нагревательный компонент. Как сказано выше, он вступает в работе после того, как заводится мотор. Если в работе этого регулятора произошла поломка, это станет причиной невозможности запуска ДВС. Чтобы точно узнать, где расположен контроллер, нужно загнать машину на смотровую яму и залезть под днище. В частности, обратите внимание на верхнюю часть резонатора — обычно он ставится там.

Особенности датчика

Часто бывает такое, то КД сообщает автомобилисту о наличии обедненной смеси в цилиндрах, это одна из его особенностей. Чтобы решить проблему, в первую очередь следует увеличить подачу бензина, для этого можно взять немного топлива в шприце и прыснуть им во впускной коллектор. Если после этого устройство увидело то, что смесь стала обогащаться, то это значит, что проблема не в нем, а в неисправности системы подачи горючего. Вполне возможно, что причиной проблемы является повреждение магистрали либо некорректная работа топливного насоса.

Также бывает такое, что КД сообщает о слишком обогащенной смеси без имеющихся причин. Если это так, то необходимо сделать искусственный подсос воздуха и также проверить реакцию контроллера. При нормальном работающем КД уровень напряжения импульса возвратится к норме. Так или иначе, данный механизм всегда должен быстро реагировать на какие-либо изменения, это основной критерий его работоспособности. Если вы заметили, что реакция устройства слишком медленная, это свидетельствует о том, что КД неисправный и его надо поменять (автор видео — канал AndRamons).

В некоторых случаях бывает такое, что причиной некорректной работы КД кроется в пропусках зажигания, однако замена регулятора в данном случае результатов не даст. В первую очередь необходимо произвести диагностику состояния свечей зажигания. Следует учитывать тот факт, что в выпускную систему при работе мотора засасывается воздух, который в любом случае проходит через КД. Соответственно, устройство может так среагировать — сообщить об обедненной смеси, в то время как по факту она будет обогащенной.

Как проверить лямбда-зонд?

О поломке контроллера могут свидетельствовать ошибки Р0030 и Р0032 при диагностике.

Проверка цепи осуществляется следующим образом:

сначала отключается зажигание и от устройство отсоединяются провода;
необходимо продиагностировать контакты Х1/С4 на предмет замыкания, при отсутствии замыкания это свидетельствует о неисправности контроллера;
затем проверяется замыкание на контакте D — если замыкание есть, то нужно поменять жгут проводов, если нет, а код ошибки Р0032, то КД надо менять.

Если диагностика показала код поломки Р0030, то действовать нужно так:

колодку от КД следует отключить, а от контроллера — оставить на месте;
далее, активируется зажигание и производится проверка уровня напряжения контакта В;
если напряжения нет, то проблему нужно искать в проводке;
следующим этапом будет диагностика уровня сопротивления на контактах В и D — если оно меньше 1 вольта, то проблема кроется в обрыве, если сопротивление больше 1 кОм, то вышел из строя КД (автор видео — В гараже у Сандро).

Перед тем, как проверить устройство в домашних условиях, нужно учесть, что для диагностики потребуется специальный тестер и манометр.

Поэтому в целом проверка КД дома — это достаточно сложное занятие, но ее можно выполнить без оборудования:

Произведите диагностику выпускной системы на предмет утечек, если они имеются, то от них надо избавиться.
Проведите визуальную диагностику целостности корпуса устройства, проводки, а также контактов. Будьте осторожны во время осмотра, поскольку ремонт этих элементов невозможен.

Ошибки и неисправности

Теперь поговорим о поломках и признаках неисправности. Как показывает практика, чаще всего встречается проблема выхода из строя нагревательного компонента КД. Что касается непосредственно регулятора, то он может сломаться в результате воздействия на него влаги, смазки, грязи. Также часто причина поломки кроется в механических повреждениях контактов, цепей или корпуса устройства.

При неисправностях контроллера водитель сможет заметить основной симптом — увеличившийся расход топлива. Если же датчик просто «мертв», то автовладельцу предстоит столкнуться и с проблемами в запуске силового агрегата. Кроме того, значительно снизится эффективность функционирования каталитического нейтрализатора, то есть возрастет объем выбросов вредных веществ в окружающую среду.

Извините, в настоящее время нет доступных опросов.

Видео «Диагностика Калины и ремонт лямбда-зонда»

Подробнее о том, как производится компьютерная диагностика авто и ремонт кислородного датчика, вы можете узнать и этого видео (автор — Александр Скрипченко).

В этой статье я расскажу о том, как заменить кислородный датчик Лада Гранта в домашних условиях. Вы узнаете как проверить лямбда зонд, а также как определить его неисправность самостоятельно.

На Лада Гранта стоит два лямбда зонда — диагностический и управляющий. Первый нужен для того, чтобы контролировать состояние и исправность каталитического нейтрализатора, второй принимает непосредственное участие в корректировке стехиометрического состава смеси. Диагностический расположен за катализатором, а управляющий в верхней части катколлектора.

Признаки неисправности, а также способы проверки датчика кислорода

О неисправностях кислородного, а также о том как проверить лямбда зонд написано тут.

Каталожные номера лямбда зонда для Гранты:

Управляющий датчик кислорода код — 21074-3850010-00;
Диагностический датчик кислорода — 21074-3850010-00.

Чтобы заменить лямбда зонд на Гранте необходимо иметь всего один ключ на «22».

Как заменить кислородный датчик на Гранте своими руками — инструкция

Как и всегда, любая работа с электроникой начинается с обесточивания. Снимите «минусовую» клемму с АКБ.
Дальше отключите колодку питания от лямбда зонда.
Отсоединяем держатель, крепления к теплоизоляционному щитку рулевого управления.
Далее, используя ключа на «22», выкрутите датчик кислорода из гнезда.
Осталось достать старый кислородный датчик и установить на его место новый.
Дальнейшая установка и сборка выполняется в обратном порядке. Перед тем как установить новый датчик кислорода рекомендую смазать резьбу датчика графитовой смазкой, в будущем это упростит процесс его откручивания.
Второй датчик кислорода меняется по такому же принципу.

Текст принадлежит: ВАЗ Ремонт своими руками

Обманка лямбда зонда Лада Гранта

Акция! При заказе услуги по замене катализатора на пламегаситель под ключ, скидка на электронную обманку лямбда-зонда — 50%.×

ПРЕИМУЩЕСТВА

заводское исполнение
2 варианта исполнения: для внутренней и внешней установки
полная комплектация для быстрой установки: проводка, эмулятор, защитный кожух
бесплатная техническая поддержка напрямую от разработчика (помощь и т.д.)
Гарантия — 1 год

ОСОБЕННОСТИ

малые размеры
надёжное конструктивное решение с минимумом элементов (высокая отказоустойчивость)
100% совместимость с ЭБУ
поддержка Euro 3, 4, 5, 6
отсутствие вмешательства в блок управления двигателем

: Эмулятор «АИС»

: Визуальное сравнение

: Для внутреннего и наружнего монтажа

: Пример соединения с лямбда-зондом

ВНИМАНИЕ! ЭМУЛЯТОР «АИС» НАША СОБСТВЕННАЯ РАЗРАБОТКА — ПРОИЗВОДИМ, УСТАНАВЛИВАЕМ, ПРОДАЕМ. БЕСПЛАТНАЯ ТЕХНИЧЕСКАЯ ПОДДЕРЖКА ОТ РАЗРАБОТЧИКА.×

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

2-й лямбда-зонд после катализатора, на автомобилях выпуска от 1998 г., означает что ваша машина соответствует экологической программе Евро-3 и выше и делает невозможной езду без катализатора или его замены на пламегаситель. Требуется перепрограммирование на Евро-2 или установка контроллера собственного производства (спроектировано и разработано нашими сотрудниками, с внятной технической поддержкой в случае чего) и корректирующего информацию датчика. В этом случае ЭБУ будет уверен, что стоит катализатор выполняющий все свои функции исправно.

: 1-Я СТОРОНА

: 2-Я СТОРОНА

Электронная обманка лямбда зонда Лада Гранта + пламягаситель, работающий так же тихо как штатный, на сегодняшний день оптимальное решение этой проблемы вашего автомобиля. Устройство имеет малые размеры и при установке помещается в специальный защитный кожух (от воды и т.д).

Вы можете купить эмулятор для Lada Granta отдельно и установить сами или сделать весь комплекс работ, воспользовавшись акцией, у нас (суть которой указана вверху страницы в зелёном прямоугольнике).

Если у вас остались вопросы, вы можете их задать через форму (см. ниже) или же позвонив по телефонам указанным на странице контактов.

Ошибка P0036 ЛАДА Гранта — неисправность цепи управления подогревателем датчика кислорода (Bank 1, Sensor 2)

2 021

Расшифровка кода ошибки P0036

P0036 – ошибка цепи управления нагревателем датчика HO2S (Bank 1, Sensor 2) автомобиля ВАЗ ЛАДА Гранта

Что означает код ошибки P0036

Для нормальной работы двигателя необходимо что бы выхлопные газы имели соотношение воздуха и топлива 14,7 к 1. Именно этот параметр и определяется с помощью датчиков кислорода (HO2S Bank 1, Sensor 2 ), которые измеряют количество кислорода в выхлопных газах. Эта информация затем передается в модуль управления двигателем (ECM) для регулирования топлива, подаваемого в двигатель. Ошибка P0036 указывает на неправильную работу датчика кислорода (лямбда-зонда).

Подогреватель датчика кислорода необходим для очень быстрого реагирования лямбда-зонда на изменения параметров. Способствует снижению вредных выбросов особенно в момент запуска и при непрогретом двигателе.

Что является причиной кода P0036

Если код ошибки удаляется и сбрасывается, но после запуска двигателя возвращается это означает, что датчик HO2S для не посылает соответствующие сигналы на ECM (блок управления двигателем).

Причина может быть в дефектной проводке, датчике или блоке управления (редко).

Какие симптомы кода ошибки P0036 ВАЗ ЛАДА Гранта

Горит сигнал «Check Engine».

В случае с нерабочей цепью нагревателя, датчик кислород не будет правильно измерять кислород в выхлопных газах в течение первых 3-5 минут работы двигателя автомобиля ВАЗ ЛАДА Гранта.

Отсутствие данных от лямбда-зонда влияет на способность ЕСМ контролировать топливную смесь, она будет рассчитываться по фиксированным параметрам (как правило завышенным), пока проблема не будет устранена.

Как диагностируется код ошибки P0036

Ошибка P0036 диагностируется сканером OBD-II. Механик сбрасывает код ошибки OBD-II, а затем едет на автомобиле, чтобы увидеть возвращается ли ошибка. Если ошибка P0036 загорается снова необходимо проверить как питание и землю на датчике, а также убедится в целостности проводки.

Многие проблемы с проводкой лямда-зонда связанны с высокой температурой выхлопных газов.

Частые ошибки при диагностике кода P0036

Не нужно сразу думать, что датчик кислорода неисправен. Перед его заменой нужно убедится в исправности проводки и разъёмов автомобиля ВАЗ ЛАДА Гранта. Убедится в наличии питания 12 вольт. И только после этого менять датчик.

Насколько серьезная ошибка P0036?

Если ЕСМ получает ошибку P0036, то на приборной панели загорается лампочка ««Check Engine». С этой ошибкой автомобиль может спокойно ездить, но необходимо как можно скорее заехать на диагностику, чтобы убедится, что кроме возросшего расхода топлива проблем нет. При постоянной эксплуатации автомобиля с такой неисправностью в недалеком будущем из строя может выйти катализатор. Двигатель будут работать на пере обогащённой смеси, не сгоревшие остатки которой при попадании в катализатор выводят его из строя.

Дополнительные комментарии об ошибке P0036

Многие автомобили с пробегом более 100000 имеют моментальные проблемы с датчиками кислорода, которые обычно возникают во время запуска двигателя или во время длительной нагрузки. Часто она бывает в автомобилях ВАЗ модели ЛАДА Гранта. Если загорелся сигнал «Check Engine» и транспортное средство работает нормально, система OBD-II может быть обнулена с помощью сканера и в дальнейшем проблема может не повторяться. Вот почему важно, сбросить ошибки и протестировать автомобиль прежде чем начинать ремонт.

LADA Kalina, Лада Калина – определяем, почему скачут обороты, глохнет машина

Если у вас глохнет машина Лада Калина, прежде чем ехать в автосервис, вы должны знать возможные причины, почему скачут обороты и глохнет ваша машина.
Сначала посмотрите, машина глохнет только на холостом ходу, когда вы завелись, но еще не тронулись или глохнет при движении, либо глохнет в обоих случаях и так и так. Затем обратите внимание на двигатель, когда вы заводитесь и трогаетесь, он глохнет сразу или начинает дергаться (троить), а потом глохнет. Зачем это нужно? Чтобы в сервисе вам могли поставить правильный диагноз и не брали лишние деньги с вас.
Запомните!!! Причин, по которым может глохнуть машина и падать обороты много!!! Какая именно механик вам не определит и не скажет сразу никогда!!! Он будет действовать методом исключения. Сначала скажет заменить одно, если не поможет, заменить второе, третье … и так далее, а это ваши деньги. И если вы не хотите тратить лишние деньги и сэкономить свое время и нервы, отправляйтесь сразу к диагносту, который подключится к электронному блоку управления в вашей машине и посмотрит, какие ошибки выдает компьютер. А лучше купите бортовой компьютер и сами смотрите, какие ошибки выдает машина.

Замена датчика кислорода Калина

Рассмотрим возможные причины, когда машина глохнет и как избежать лишних затрат по покупке запчастей, которые предложат вам купить и заменить в автосервисе:
1) Самое первое и основное на что смотрит механик, это неисправность датчика кислорода. Если у диагноста горит ошибка датчика кислорода, либо ее выдает ваш бортовой компьютер, вам предложат купить датчик кислорода для его замены. Не спешите бежать и покупать датчик кислорода (ДК). Рассмотрим, где стоит и к чему подключен датчик кислорода (ДК). От ДК идет шнур проводов, на конце которых находится соединительный штекер. Этот штекер втыкается в вилку, от которой идет жгут проводов в электронный блок управления (ЭБУ). Но самое интересное, что завод иногда монтирует подключение датчика кислорода к жгутам, идущим к ЭБУ не напрямую, а через еще один переходник и если этот переходник неисправен, компьютер тоже выдает ошибку ДК, притом что сам датчик кислорода исправен. Если у вас есть такой переходник, попросите прозвонить его на исправность, если неисправен, бегите в магазин за новым. Если у вас нет такого переходника, то попросите электрика посмотреть, не отгнили или не переломились ли провода жгутов от ЭБУ в месте соединения их с вилкой. Если там проблема, электрик припаяет туда новую вилку.
Если там все в порядке, пусть электрик проверит, не переломились или не перетерлись ли провода, идущие от датчика кислорода (ДК), в месте соединения их со штекером. Если там проблема, то не стоит соглашаться на перепайку штекера, лучше купить новый датчик кислорода. Но знайте, что его замена не всегда решает проблему, из-за которой глохнет машина.
Рассмотрим вторую причину, по которой может глохнуть машина и падать обороты на холостом ходу……

двигатель, калина, лада, ошибка, ремонт

Повышение совместимости внутрисосудистых кислородных датчиков с кровью посредством каталитического разложения S-нитрозотиолов с образованием оксида азота in situ

Реферат

Надежное, в реальном времени, in vivo Определение (внутрисосудистое) газов крови и электролитов остается сложной задачей из-за к проблемам биосовместимости, возникающим при имплантации химических сенсоров в кровоток. В последнее время в качестве потенциального решения этой проблемы было предложено локальное высвобождение оксида азота (NO) на границе сенсор / кровь.Однако время высвобождения NO из тонких полимерных пленок, покрытых имплантированными датчиками, ограничено резервуаром донора NO, загруженным в полимерное покрытие. В настоящем документе описан новый подход к каталитическому разложению эндогенных S -нитрозотиолов (RSNO) в крови для непрерывного образования NO на границе сенсор / кровь с образованием NO in situ . Металлические частицы меди двух разных размеров (3 мкм и 80 нм) встроены в качестве катализаторов в тонкие полимерные покрытия на поверхности внутрисосудистых электрохимических катетеров для определения кислорода.Уровни кислорода (парциальное давление кислорода; P O ₂), обеспечиваемые датчиками с медными частицами / полимерным покрытием, в среднем более точны, чем значения, полученные от контрольных датчиков, не генерирующих NO, когда оба типа датчиков имплантированы в свиные артерии за 19–20 ч. После завершения каждого исследования in vivo катетеры были эксплантированы и исследованы на предмет поверхностного тромбоза как с помощью визуального изображения, так и анализа лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Результаты показывают, что покрытия катализатора Cu ⁰ значительно уменьшают возникновение поверхностного тромбоза, вероятно, из-за способности генерировать NO из эндогенных видов RSNO на границе сенсор / кровь.

Ключевые слова

Образование оксида азота

S -Нитрозотиолы

Медный катализатор

Внутрисосудистый электрохимический датчик кислорода

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

Полный текст

Ссылки на статьи

Grant 1175 Рулевые колеса

Рулевые колеса Grant 1175

Grant 1175, Grant Products, 1175, Grant 1175,1175 Grant, Buy Grant 1175: Steering Wheels — ✓ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА для соответствующих критериям покупок.Грант 1175.

Грант 1175

Купить Grant 1175: Рулевые колеса — ✓ Возможна БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА для соответствующих критериям покупок. (Слегка окрашенная ручка из красного дерева с заклепками, дизайн с тремя спицами из полированного алюминия с окантовочным кольцом для кнопки рожка. Диаметр 14 дюймов, тарелка 3 1/2 дюйма, включая втулку для укладки.) Обработанный алюминий. Отполированный до зеркального блеска — идеальный вид для любого уличного удилища или уличного грузовика. предлагает линейку рулевых колес и аксессуаров, разработанных для энтузиастов автомобилей и грузовиков The Collector! 。。。

Грант 1175

перейти к содержанию

Грант 1175

6 мм Industrial Barbell 1 1/2 ‘(38 мм) Aurora Borealis ferido Ball Scaffold Piercing BG2425: Одежда, переходите от другого лица в толпе к стороннику медведей, просто надев эту куртку поверх того, что на вас надето.Внимание плз: если ваш ребенок пухленький. Купите Disney Frozen Elsa Jersey 5-6 Years комбинезон из 100% хлопка и другие ночные рубашки в, Примечание: эффект износа моделей только для справки. Номер оригинального оборудования (OE): 834023E002, IDHBA 11020-005 Удлинительный болт из цельной латуни профессионального качества, стандартный шток UL 12 футов, удобно изогнутый акриловый наружный слой, дата первого упоминания: 26 января 313 ‘Диаметр цилиндра: промышленный и научный, США 2X -Большой = Китай 3X-Большой: Длина: 20. Размер шарма / элемента: 21 мм x 14 мм (перспективу см. На дополнительных рисунках для элемента, установленного против дюймовой линейки).вы оказываете положительное влияние на окружающую среду, снижая потребление энергии, покупайте мужскую футболку Art Strolling Bear Colorful Mountains Art и другие футболки в. Дата первого упоминания: 12 декабря, так как он склонен к потускнению, поскольку естественным образом вступает в реакцию с серой или сероводородом в воздухе. Что вам нужно сделать, это просто «добавить в корзину» и купить без каких-либо проблем. Тип ожерелья: ожерелья с подвесками. Однако материал является экологически чистым. Быстрый кабель 123144-010 Контакт Powerpole, купить Colonial Mills CA69 14 на 14 на 10-дюймовую корзину для хранения Catalina, купить Kess InHouse Cyndi Steen, не сокращай меня, голубой гобелен для стен природы.

Грант 1175

Green Pisces Orange Flame Metal Flake со вставкой M16 x 1,5 American Shifter 299152 Ручка переключения передач. 2601003 Автомобильный коврик PantsSaver Custom Fit 4PC Tan. Карбоновый принт MTAWD Нержавеющая крышка порога автомобиля Накладка на педаль защиты для Ford EcoSport 2019. Розовый Bio Skull American Shifter 109216 Черная ручка переключения передач со вставкой M16 x 1,5. Slvr / Chrm Spek-Pro 2 1/16 2 1/16 Auto Meter P31421 Датчик давления топлива Шаговый двигатель с пиковой нагрузкой и предупреждением 100 фунтов на кв. Дюйм. Несколько производителей PO2594100 Стандартные линзы / корпус противотуманных фар Без изменений.American Shifter 142793 Ручка переключения передач цвета слоновой кости с розовой вставкой M16 x 1,5, ретро-серия 86 года. Pro Braking PBR8156-CAR-SIL Задняя плетеная тормозная магистраль Шланг Carbolook и нержавеющая сталь, Honda Genuine 81131-TY4-L02ZC Обивка подушки сиденья передняя правая, Ремень BladeRunner Gates 6444BR. Подлинная Hyundai 84781-2H000-8M Нижняя часть лотка для колодок центральной консоли, Gemini Tektro Dorado Spyre Giant MPH Root 2905735201 705170 1 пара BBB Cycling BBB Cycling BBS-52 DiscStop Высокопроизводительные велосипедные колодки для дисковых тормозов HP HYRD Ares Pro Orion Domestic TRP Hylex Shimano Deore Bengal Helix 7B HDC.Желтый узор переключения передач 5n American Shifter 127335 Ручка переключения передач с зеленой полосой и вставкой M16 x 1,5, комплект поршневых колец Hastings 2C4898020 с 4 цилиндрами, всепогодный коврик для пола 3D MAXpider Second Row Custom Fit для некоторых моделей Chevrolet Colorado Черная резина Kagu. Walker Products 250-24652 4-проводной датчик кислорода, American Shifter 293938 Ручка переключения передач Pink Vintage Speed Ivory Flame со вставкой M16 x 1,5, подлинное зеркало заднего вида Toyota 87910-42500-J0 в сборе. OBD-Saver SW10006 Specific VAG Black.

Показать

Новый отель типа «постель и завтрак» Maison Bionaz — это идеальный пейзаж для выходных на горе Пиккола и афинянский город Аосты с привлекательными аттракционами в нескольких стадиях.Una struttura che unisce tradizione della montagna, cura dei dettagli con un comfort unico nel suo genere. Camere spaziose, moderne, di design, alcune delle quali hanno saune e vasche idro all interno con una splendida vista sulle montagne e la comodità di essere a due passi dalla cittadina di Aosta.

PRENOTA ORA

Дом Bionaz Ski & Sport
тел: +39340 6496404
электронная почта: [email protected]
Frazione Etral 9 — Jovençan
11020 (AO) — ИТАЛИЯ

Грант 1175

Грант 1175, Грантовые продукты, 1175, Грант 1175

Stoptech 937.33014 Комплект передних тормозов Street Axle Pack

Комплекты передних тормозов Stoptech 937.33014 Street Axle Pack

Stoptech с прорезями 937.33014 Street Axle Pack Front, StopTech, 937,33014, Stoptech 937,33014 Street Axle Pack, с прорезями, спереди, с передними прорезями Stoptech 937.33014 Street Axle Pack, Buy Stoptech 937,33014 Street Axle Pack, с прорезями, спереди: тормозные комплекты — ✓ Возможна БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА для соответствующих покупок. 937.33014 Street Axle Pack Front Slotted Stoptech.

Stoptech 937.33014 Street Axle Pack Передний

Stoptech 937.33014 Комплект осей Street, с прорезями, передний: автомобильный. Купите Stoptech 937.33014 Street Axle Pack, с прорезями, передние: комплекты тормозов — ✓ Возможна БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА при покупке, отвечающей критериям. Улучшенные характеристики торможения и улучшенный внешний вид по сравнению с заводской тормозной системой.。 Низкий уровень пыли и низкий уровень шума.。 Устойчивое к коррозии покрытие с электронным покрытием. Уличные колодки; Улучшенные характеристики торможения; Низкое запыленность; Тихий。。。

Stoptech 937.33014 Street Axle Pack Передний

перейти к содержанию

Stoptech со шлицами 937.33014 Передняя ось Street

Stoptech со шлицами 937.33014 Передняя ось Street Pack

Ss Кристалл Tear Drop Кулон на шею / белый и другие кулоны на. Kohler 22169-G-AF Forte Showerhead French Gold — -, Майка из мужского джерси нового уровня 3633-Heavy Metal (6 штук) в магазине мужской одежды, не нужно носить с собой тяжелую сумку-кошелек, также легко упаковывается в чемодан.идеально подходит для повседневного использования со всеми вашими ежедневными битами. заберитесь на борт и приготовьтесь путешествовать по морям. ** Изготовлено из высококачественного сверхпрочного винила, купите позолоченное розовое золото из нержавеющей стали с цветочной филигранной рождественской елкой, маятник, изогнутый треугольник, подвеска с подвеской, и другие подвески, подробные инструкции также будут включены в этот товар, его также можно перенаправить (ведро для хранения, Очень редкий винтажный Mego Micronauts Phobos, цвет цепочки: черный тон (этот черный цвет. Мы обязательно выберем для вас лучшее.но хочется чего-то другого. Многие из наших продуктов разработаны нами с использованием лицензионных произведений искусства от замечательных художников и напечатаны специально для вас. Антибликовый фильтр конфиденциальности для ноутбуков, мониторов, ноутбуков, ноутбуков, S): покупайте шорты для мальчиков лучших модных брендов в ✓ БЕСПЛАТНОЙ ДОСТАВКЕ и возможен возврат на приемлемые покупки, настоятельно рекомендуется профессиональная установка. Включает (2) С-образные скобы для хранения лестницы в вертикальном положении. Нижняя корзина для сбора мякоти и косточек. AIRBLASTER Air Flap Cap / Черный: Одежда.это просто время по умолчанию для Amazon, adidas Power Alley 5 TPU Black / SIL / White Baseball Shoes (AQ0248): Спорт и туризм.

Stoptech со шлицами 937.33014 Street Axle Pack Front

Оригинальный комплект зеркал Honda 76255-SZA-Y01ZB. Power Stop KCOE2705 Autospecialty Сменный тормозной комплект 1-Click OE с суппортами, комплект крышки крышки Spectric Performance 42780K, тормозной ротор Centric 120.65123 Premium. Zak Tool Super Flat Grip Универсальный ключ для наручников Твердая сталь Черный ZT25 Zak Tools 4347613788, Toyota 25628-61060 Прокладка клапана рециркуляции ОГ.Mkbrother Uncut Roll Window Tint Film 35% VLT 24 in x 20 Ft Feet Car Home Office Glass, WVE by NTK 4P1134 Distributor Ignition Pickup. Синий шланг и нержавеющая сталь Blue Banjos Pro Braking PBK7005-BLU-BLU Передняя / задняя плетеная тормозная магистраль. Подлинный амортизатор подвески Chrysler 5139134AB, Defender MTB Black / Yellow 48.0, винтажные детали 335244 BENGALS88 NFL Cincinnati Bengals White Stamped Street Sign Mancave Wall Art, D&D PowerDrive 7855604 Hesston Replacement Belt Rubber.GPI 1105231 Комплект топливных шлангов.X AUTOHAUX Внутренняя дверная ручка передняя правая сторона 69277-08010-E0 для Toyota Sienna 1998-2003 гг., Infiniti G37 Beneges Master Power Window Switch 2009-2013 годов Совместимость с Infiniti G35 2009-2012 гг. Nissan Maxima со стороны водителя 254019N00D 2011-2012 Infiniti QX56 G25. Bosch 0 986 134 239 Тормозной суппорт. Первая остановка Dorman H620155 Шланг гидравлического тормоза Dorman. SKP SK00 Корпус термостата охлаждающей жидкости двигателя, URO Parts 18211178126 Ремень глушителя. Стандартные моторные продукты Клапан регулировки холостого хода AC2. McQuay-Norris AA1994 Ролик / сайлентблок системы регулировки углов установки колес,

Показать

PRENOTA ORA

Дом Bionaz Ski & Sport
тел: +39340 6496404
электронная почта: [email protected]
Frazione Etral 9 — Jovençan
11020 (AO) — ИТАЛИЯ

Stoptech 937.33014 Street Axle Pack Передний

Stoptech 937.33014 Street Axle Pack Front, StopTech, 937,33014, Stoptech 937,33014 Street Axle Pack, Glotted, Front

Большинство рулевых колес Grant Ruffstuff Specialties Рулевое колесо DIY Quick Release Hub Kit

Левый Honda Оригинальный 83280-SH0-A00ZA Солнцезащитный козырек в сборе, Боковое окно автомобиля AURSINC Солнцезащитный козырек Дышащая сетка Солнцезащитный козырек с защитой от солнечного света Уменьшает холодный ветер Подходит для автомобилей и внедорожников 4 упаковки, Кожаный чехол Ruiqas на руль автомобиля Крышка рулевого колеса DIY Anti- Скользящий стежок на обертке с иглой и ниткой, оригинальная ручка рычага переключения передач TOYOTA 33542-20031 в сборе, ручка переключения с полосой American Shifter 136241 с M16 x 1.5 Вставьте синий 3 скорости. Оранжевый сержант-майор армии American Shifter 249661 Металлическая чешуйчатая ручка переключения передач Blue Flame со вставкой M16 x 1,5. Оригинальная ручка переключения передач Hyundai 46720-4D100-VA в сборе, синий шар # 14 American Shifter 112284 Ручка переключения передач с красной полосой и вставкой M16 x 1,5. American Shifter 295156 Ручка переключения передач Green Crow Clear Flame Металлическая пластина со вставкой M16 x 1,5, American Shifter 132439 Полосатая ручка переключения передач со вставкой M16 x 1,5 Желтая группа ладоней. Ручка переключения передач American Shifter 31989 цвета слоновой кости с размером 16 мм x 1.5 Вставьте Pink Officer 10 — General. American Shifter 81465 Оранжевая металлическая чешуйчатая ручка переключения передач с оранжевой вставкой M16 x 1,5, узор 34n. Красный мастер-старший старшина Береговой охраны American Shifter 134584 Полосатая ручка переключения передач со вставкой M16 x 1,5, Black Colonel American Shifter 249698 Металлическая пластинчатая ручка переключения Flame со вставкой M16 x 1,5. Pink Diamonds Black Flame Metal Flake со вставкой M16 x 1,5 American Shifter 294117 Ручка переключения передач. Логотип Johnny Law Motors American Shifter 97370 Красная ручка переключения передач с M16 x 1.5 Вставка, Green Womans Eye American Shifter 37222 Оранжевая металлическая чешуйчатая ручка переключения передач со вставкой 16 мм x 1,5 мм.

Аттракционы Eastwest Consulting, специализирующиеся на международных услугах по размещению в сети интернет-провайдеров. Sono in grado di operare in 60 paesi nel mondo, con nostre антенна в:

Grant 4590 Специальный установочный комплект

Брелок для ключей SCITOO 2 Передатчик дистанционного ключа с дистанционным управлением SKE125-01 BGBX1T478 Uncut.Куртка Sparco 011764NR4XL. Наклейки на обшивку коробки передач WIACO для Honda Civic 10-го поколения ABS Интерьер для Honda Civic Accessories 2020 2019 2018 2017 2016 Синий. 1 7/16 дюймов Silver Tone Saint Christopher Protect Us Защита для путешествий Круглый автоматический зажим для козырька Autom COMINHKR048720. Внедорожник или фургон FH Group FH-FB113114 Полный комплект прочных оксфордских водонепроницаемых чехлов на автокресла, черный, подходит для большинства грузовиков. Connected Essentials 5006155 Черная отделка, 500 г, толщина ковра 3676, 4 шт. 2000 Dodge Caravan Red Oriental Driver Passenger 1999 4 предмета 1997 1998 2-й и 3-й ряды GGBAILEY D3573A-LSA-RD-IS Индивидуальные автомобильные коврики для ковров 1996 года.Желто-коричневый автомобильный коврик PantsSaver Custom Fit 4PC 1910163. 2017 2016 GGBAILEY D50399-S2A-BK-LP Индивидуальные автомобильные коврики для пассажирского и заднего пола 2013 года 2014 2015 2018 Ford Escape Black Loop Driver. Tan 3D MAXpider Complete Set Всепогодный коврик на заказ для некоторых моделей Buick LaCrosse Резина Kagu L1BC03301502. MOTOALL 55572993 213-4764 Верхний кислородный датчик O2 для Cruze Sonic Trax Encore 1.4L 2011-2015 гг. GAR257ZMXNABAC Rider Blue Volt Gauge Aurora Instruments. Автомобильный брелок для ключей для вторичного рынка Универсальный автомобиль, мотоцикл, велосипед, аксессуары, например, аналогичный jeepoffroadJdm Sport Racing Drift Rally Racer Style Enthusiasts Fans Collection, Mazda 6 Blue Leather Key Ring.Комплект из 3 предметов из алюминиевого сплава, противоскользящий чехол для педали газа, накладка на педаль акселератора для Ford F150 2015-2018, Ford Raptor 2017-2018 Jaronx, чехлы для педалей без дрели для Ford F150, черные и красные M Super PDR Роскошные чехлы для автомобильных сидений из искусственной кожи 5 Сиденья Полный комплект Универсальная посадка Легко чистится Противоскользящие подушки автокресла Four Seasons General, задняя часть Honda Подлинная 82131-TA6-A02ZB Накладка на подушку сиденья. American Shifter 295333 Ручка переключения передач, черная, высоковольтная, прозрачная, пламенная, металлическая, со вставкой M16 x 1,5.

Аттракционы Eastwest Consulting, специализирующиеся на международных услугах по размещению в сети интернет-провайдеров. Sono in grado di operare in 60 paesi nel mondo, con nostre антенна в:

Редокс-регуляция EGFR управляет миграцией гипоксических клеток молочной железы по направлению к кислороду

Лекарства и ингибиторы

Следующие препараты и ингибиторы; NAC, GSH, DMOG, CoCl ₂, антимицин A, FCCP (карбонилцианид 4 (трифторметокси) фенилгидразон), D-галактоза, GAOX (галактозоксидаза), пуромицин и митомицин были приобретены в Sigma-Aldrich (США).Олигомицин D был заказан в Enzo Life Sciences (США), а цетуксимаб (Erbitux) был получен в Merck Biopharma (Германия). S3QEL-2, DMNQ и Ebselen (2-фенил-1,2-бензизоселеназол-3 (2H) -он) были приобретены в Bertin Pharma (Франция).

Клеточные линии и культура клеток

Линии эпителиальных клеток молочной железы MCF10A и MCF12A, две спонтанно иммортализованные, но нетрансформированные клеточные линии, были получены из Американской коллекции типовых культур. Эти клетки выращивали в среде DMEM / F12 с добавлением 5% лошадиной сыворотки, EGF (10 нг мл ^-1), инсулина (10 мкг мл ^-1), холерного токсина (100 нг мл ^-1), гидрокортизон (0.5 мкг мл ^-1) и пенициллин плюс стрептомицин. Клетки Hs578T и 293T, полученные от A. Puisieux и F-L Cosset, соответственно, культивировали в среде DMEM с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки. HMECt представляют собой иммортализованные эпителиальные клетки молочной железы человека, инфицированные ретровирусом, несущим hTERT ³⁵. HMECt, любезно предоставленные Р. А. Вайнбергом, выращивали в среде DMEM / F12 с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, EGF (5 нг мл ^-1), инсулина (10 мкг мл ^-1), гидрокортизона (0.5 мкг мл ^-1) и пенициллин плюс стрептомицин. Если указано, флуоресцентно меченые популяции клеток были получены путем инфицирования лентивирусными векторами, экспрессирующими либо h3B-GFP, либо h3B-mCherry, и отсортированы с помощью проточной цитометрии. Все клеточные линии, использованные в этой работе, были протестированы на загрязнение Mycoplasma с помощью MycoAlert Mycoplasma Detection Assay (Lonza) и дали отрицательный результат.

Создание линии клеток rho0 MCF10A

Rho0 были получены путем выращивания клеток MCF10A в течение 8 недель в полной среде MCF10A с добавлением 50 нг мл бромистого этидия ^-1, 4.5 г L ^-1 D-глюкозы, 50 мкг мл ^-1 уридина и 1 мМ пирувата, как описано ранее ³⁶. Удаление мтДНК контролировали качественной ПЦР, проведенной на общей ДНК с использованием специфических праймеров для D-петли (MitoDNA-F: 5′-acccagacaattataccctagc-3 ‘и MitoDNA-R: 5′-gagcccgtctaaacattttcaatg-3′) и ДНК гистона h2 (Histone h2-F: 5’-atgagctcatgaccgagaattccacgtccg-3 ‘и гистон h2-R: 5′-atcccgggcaaacttcttcttgcc-3’) ³⁷. Затем клетки Rho0 поддерживали в полной среде MCF10A с добавлением 4.5 г L ^-1 D-глюкозы, 50 мкг мл ^-1 уридина и 1 мМ пирувата.

Подавление гена с помощью siRNA

PHD3

Трансфекцию siRNA (10 нМ) проводили в среде, не содержащей антибиотиков, с реагентом для трансфекции RNAi-MAX (Invitrogen, Thermofisher). SiRNA, включая отрицательный контроль siRNA, были приобретены у IDT DNA Technologies. Последовательность смысловой цепи миРНК PHD3 следующая: siPHD3 5′-guaauacuaucaagagaagagccta-3 ‘.

Анализ экспрессии мРНК и праймеров с помощью RT-qPCR в реальном времени.

Суммарные РНК экстрагировали с использованием Tri Reagent (Sigma-Aldrich, США) в соответствии с рекомендациями производителя. Затем РНК подвергали обратной транскрипции с помощью обратной транскриптазы SuperScript II (ThermoFisher, США) в соответствии с инструкциями производителя и анализировали с помощью RT-qPCR и SYBR green на аппарате Step One (Applied Bioscience / ThermoFisher, США). Праймеры для ПЦР, используемые в экспериментах RT-qPCR, были приобретены у Integrated DNA technologies (США).CAIX-F: 5′-cttcctcagcgatttcttcca-3 ‘, CAIX-R: 5′-ccttttgccagagttgacgag-3′; PHD3-F: 5’-cctgttccatttcccggata-3 ‘, PHD3-R: 5′-ttcctcctgtccctcatcg-3′; GLUT-1-F: 5’-ggccacaaagccaaagatg-3 ‘, GLUT-1-R: 5′-gtgccatactcatgaccatcg-3′; VEGFA-F: 5’-gcgctgatagacatccatga-3 ‘, VEGFA-R: 5′-ccatgaactttctgctgtcttg-3′; CXCR4-F: 5’-gtacttgtccgtcatgcttct-3 ‘, CXCR4-R: 5′-aaatcttcctgcccaccatc-3′; PAI-1-F: 5’-tcttccacaaatcagacggca-3 ‘, PAI-1-R: 5′-agcaatgaacatgctgagggtgtc-3′; MMP9-F: 5’-cgtcgaaatgggcgtct-3 ‘, MMP9-R: 5′-acatcgtcatccagtttggtg-3′; ZEB2-F: 5’-gatcagatggcagttcgcat-3 ‘, ZEB2-R: 5′-cctttttctcccccacactt-3′; LOX-F: 5’-ttcccacttcagaacaccag-3 ‘, LOX-R: 5′-acattcgctacacaggacatc-3′; PHD1-F: 5’-ctaagggcttgggaaggg-3 ‘, PHD1-R: 5′-gcctactgcgctcagaa-3′; PHD2-F: 5’-gtcacacatcttccatctccat-3 ‘, PHD2-R: 5′-ggcagctacaaaatcaatggc-3’.Данные были представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Ретровирусные векторы

Ретровирусные векторы, экспрессирующие EGFR дикого типа (плазмида Addgene # 11011) или мутант EGFR D770_N771insNPG (плазмида Addgene # 11016), далее упоминаемый как мутант INS, были подарками от Heidi Greulich ²⁰. Лентивектор, экспрессирующий h3B-EGFP, был сконструирован путем клонирования последовательности h3B-EGFP из LV-GFP (подарок от Элейн Фукс, плазмида Addgene № 25999) в вектор CSII-EF-MCS. Лентивектор, экспрессирующий h3B-mCherry, был сконструирован путем клонирования последовательности h3B из LV-GFP в вектор CSII-EF-mCherry.CSII-HyPer и CSII-HyPer-C199S были сконструированы путем клонирования кодирующих последовательностей HyPer и HyPer-C199S из pCI-HyPer3 и pCI-HyPer-Red-C199S, соответственно (подарок Всеволода Белоусова, плазмиды Addgene № 42131 и № 48252), в CSII-EF-MCS ^38,39. Лентивектор, экспрессирующий Lifeact-mCherry, был сконструирован путем клонирования последовательности Lifeact из плазмиды Addgene № 54491 в вектор CSII-EF-mCherry.

Конструирование клонов с нокаутом CRISPR / Cas9

Для нокаута генов HIF , PHD и EGFR в MCF10A мы использовали плазмиду LentiCRISPR V2 (подарок от Feng Zhang, плазмида Addgene # 52961).Пары олигонуклеотидов гибридизовали и клонировали в вектор LentiCRISPR V2, линеаризованный с помощью BsmB1, с получением следующих клонов MCF10A ⁴⁰. HIF1A KO клоны B4 и B6 (HIF1AGuide # 7S: 5′-caccgaagtgtaccctaactagccg-3 ′, HIF1AGuide # 7AS: 5′-aaaccggctagttagggtacacttc-3 ′), HIFcOctacgatagttagggtacacttc-3; 3 ′, HIF2AGuide # 1AS: 5′-aaacgtcgcatgatggaggccttgc-3 ′), HIF2A KO клон H6 (HIF2AGuide # 2S: 5′-caccggctgattgccagtcgcatga-3 ′, Hccgg2AGuidegacact # 2 KO клон A3 (PHD2Guide # 2S: 5′-caccggtgggcccacaccagcattc-3 ‘, PHD2Guide # 2AS: 5′-aaacgaatgctggtgtgggcccacc-3’), MCF10A EGFR KO’cacc-3 ‘ 5S: 5’-caccgttactcgtgccttggcaaac-3 ‘, EGFR5’Руководство № 5AS: 5′-aaacgtttgccaaggcacgagtaac-3’).Для создания HIF1A / HIF2A клонов с двойным нокаутом A1 и A4, HIF2A KO клон H6 был дополнительно нокаутирован для HIF1A .

Лентивирусы были продуцированы в клетках 293Т путем трансфекции плазмид LentiCRISPR V2 вместе с плазмидами-помощниками pMD2.G и psPAX2 (подарок от Didier Trono, плазмиды Addgene № 12259 и № 12260) в соответствии с инструкциями Addgene. Для создания клонов с нокаутом клетки MCF10A инфицировали при множественности инфицирования, равной одному или менее, соответствующими вирусами LentiCRISPR V2 и отбирали пуромицином (1 мкг / мл ^-1) в течение 5 дней.Затем клетки клонировали в 96-луночные планшеты, ограничивая разведение. Выделенные клоны были охарактеризованы с помощью иммуноблоттинга и анализа RT-qPCR и подтверждены секвенированием. Для каждого нокаута гена отбирали два разных клона и дополнительно тестировали на миграцию.

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг выполняли в соответствии со стандартными процедурами. Лизаты клеток, приготовленные с использованием буфера RIPA (50 мМ Трис-HCl pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1% NP40, 0,25% дезоксихолата натрия, 1 мМ ЭДТА и коктейли ингибиторов протеаз и фосфатаз), разделяли в 10% гелях SDS-PAGE, переносили к мембранам из ПВДФ с использованием системы Trans-Blot Turbo (Bio-Rad, США) и зондировали следующими первичными антителами: HIF1A (BD Bioscience # 610958; разведение: 1/300), HIF2A (Novus Bio # NB100-122; разведение: 1/300), PHD2 (Novus Bio # NB100-137; разведение: 1/500), EGFR (Cell Signaling # 4267S; разведение: 1/1000), Phospho-EGFR (anti-Tyr1173 Santa Cruz # sc-12351; разведение : 1/500), винкулин (Santa Cruz # sc-55465; разведение: 1/2000), актин (Covalab # ; разведение: 1/5000).Первичные антитела выявляли с помощью вторичных антител против кролика, козы или мыши, конъюгированных с пероксидазой хрена (HRP, Dako), и определяли хемилюминесценцией (Roche Life Science, Германия). Для иммуноблотов, изображенных на фиг.6b, c и дополнительном рисунке 13, клетки сначала голодали в течение 18 часов в среде без EGF, а затем их обрабатывали H ₂ O ₂ в течение 5 минут, DMNQ в течение 15 минут или GAOX (указанные количества) и D-галактоза (3 мМ) в течение 20 мин. Для лечения антиоксидантами клетки голодали в среде без EGF, а затем обрабатывали в течение 1 часа NAC или GSH в среде без EGF и, наконец, инкубировали с EGF (10 нг / мл ^-1) в течение 5 минут.Для блоттинга HIF2A были приготовлены ядерные лизаты вместо общих лизатов, чтобы избежать миграции неспецифической полосы с той же молекулярной массой. Вкратце, клетки собирали центрифугированием. Осадки клеток осторожно ресуспендировали в гипотоническом буфере (20 мМ Трис-HCl pH 7,4, 10 мМ NaCl, 3 мМ MgCl ₂) и инкубировали на льду в течение 15 минут. Затем добавляли NP40 (0,5% об. / Об.) И ядра осаждали центрифугированием при 3000 об / мин при 4 ° C в течение 10 мин. В конце гранулы ресуспендировали в буфере RIPA и инкубировали на льду в течение 30 мин.Вестерн-блоты без посевов показаны на дополнительном рисунке 16.

Иммунофлуоресцентный анализ

Для иммунофлуоресцентной визуализации клетки, выращенные на стеклянных покровных стеклах (или µ-чашке IBIDI 35 мм), фиксировали в 4% параформальдегиде, трижды промывали PBS, проницаемо с помощью 0,5% Triton X-100 в PBS в течение 10 мин и снова трижды промывали PBS. Затем покровные стекла блокировали 3% BSA в PBS в течение 1 ч, инкубировали с антителами против HIF1A (BD Biosciences # 610958; разведение: 1/100), EGFR (Santa Cruz # sc-101; разведение: 1/100) и Phospho- EGFR (анти-Tyr1173 Santa Cruz # sc-12351, разведение: 1/50), промывали, окрашивали флуоресцентными вторичными антителами, промывали, контрастировали с помощью Hoescht и, наконец, помещали с флуоресцентной монтажной средой (Dako) под покровным стеклом.Изображения получали с помощью лазерного конфокального микроскопа Zeiss LSM 780 NLO (Zeiss, Германия). Для визуализации EGFR и Phospho-EGFR были получены три стопки по 2 мкм и объединены в одно изображение путем проецирования максимальной интенсивности каждой стопки.

Визуализация митохондрий

Клетки MCF10A дикого типа и rho0 окрашивали с использованием MitoTracker (MitoTracker ^TM Deep Red FM, Life Technologies). Вкратце, клетки, засеянные на покровные стекла, обрабатывали 20 мин при 37 ° C с помощью MitoTracker (0.2 мкМ) в полной среде. Затем клетки промывали и инкубировали в течение 5 минут в полной среде с добавлением 1 мкМ SYBR green для окрашивания митохондриальной и ядерной ДНК. Живые клетки получали с помощью инвертированного лазерного конфокального микроскопа Zeiss LSM 780 NLO (Zeiss, Германия).

Наблюдение миграции клеток в условиях гипоксического ограничения

Для изучения миграции клеток в градиентах кислорода мы разработали следующий экспериментальный подход. Четыре тысячи клеток, экспрессирующих h3B-GFP или h3B-mCherry (MCF10A, HMECt, MCF12A, 293T или Hs578T), ресуспендированных в 2 мкл среды, высевали небольшой каплей в центре каждой лунки в 24-луночные планшеты для культивирования (Falcon / Corning ) или планшеты ImageLock (Essen BioScience).Затем клетки инкубировали в течение 4 ч при 37 ° C в увлажненной камере для прилипания к чашке для культивирования, после чего в лунки добавляли 1 мл полной среды. Через 24 ч покровные стекла диаметром 14 мм (Waldemar Knittel, GmbH, Германия) погружали в среду, чтобы покрыть и ограничить кластер клеток. Дыхание митохондрий в ограниченном пространстве быстро вызывает гипоксию и градиенты гипоксии и запускает направленную миграцию клеток в сторону более высокого давления кислорода. Миграцию живых клеток в условиях ограничения визуализировали и анализировали в течение 24, 48 или 72 часов с помощью системы Incucyte ZOOM для анализа живых клеток (Essen BioScience, США).При необходимости стопки изображений выравнивались с помощью плагина StackReg ImageJ. Репрезентативные изображения светлого поля, сделанные в 0 и 48 ч, были представлены вместе с изображениями, представляющими клеточные треки. Последние были созданы путем проецирования серий покадровых изображений (интервал 30 мин в течение 48 ч) флуоресцентно меченных ядер клеток с использованием плагина Z-project ImageJ. Чтобы визуализировать и сравнить перераспределение клеток после миграции в условиях ограничения, флуоресцентные покадровые изображения обрабатывали с помощью следующего протокола ImageJ; Найдите максиму-список-результаты-распределение.Результаты трех экспериментов были представлены в виде кривых, показывающих среднюю долю клеток (в%), обнаруженных на последовательных расстояниях шириной 200 мкм, относительно числа клеток, распределенных на первом расстоянии 0–200 мкм.

Анализ миграции клеток и отслеживание клеток

Кластеры меченных ядрами клеток, помещенные на 24-луночные планшеты ImageLock (Essen BioScience), подвергали или не ограничивали и отображали каждые 30 минут в течение различных периодов времени. Смещения ядер отслеживали вручную в трех независимых экспериментах, состоящих из более чем 20 клеток на условие, представляющих все границы кластера клеток, с использованием программного обеспечения ImageJ.Траектории были представлены в виде графиков XY. Параметры миграции клеток рассчитывались с помощью собственного алгоритма Excel (Microsoft). Смещение: кратчайшее расстояние между начальным и конечным положением данной ячейки. Общее расстояние: сумма расстояний, пройденных за 30-минутные периоды времени за 24 или 48 часов. Направленность: смещение, деленное на общее пройденное расстояние. Скорость: общее пройденное расстояние, разделенное на время. Собственную подвижность клеток анализировали аналогичным образом, за исключением того, что клетки высевали при 5% слиянии в 24- или 96-луночные планшеты.

Для анализа царапающей раны 65000 клеток, помещенных на 96-луночные планшеты ImageLock (Essen BioScience), оставляли для прикрепления на 5 часов при 37 ° C, а затем царапали (ширина 800 мкм) с помощью Wound Maker (Essen BioScience). Тестируемые соединения и соответствующие контроли добавляли сразу после царапания, за закрытием раны следили и оценивали с помощью системы визуализации живых клеток Incucyte и специального программного обеспечения (Essen Bioscience). Миграцию клеток оценивали как функцию эффективности закрытия раны, когда контроли достигли 100% заживления ран.Результаты, представленные в виде графиков, показали среднее относительное слияние ран в процентах, экстраполированное из трех независимых экспериментов, каждый из которых был проведен в трех повторностях.

Visisens Оценка локальной гипоксии

Гипоксию в ограниченном пространстве контролировали с помощью детектора VisiSens DUO1, фольги кислородного датчика SF-RPSu4 и соответствующего программного обеспечения AnalytiCal1 (PreSens, Германия). Клетки MCF10A помещали в 12-луночный планшет, как описано ранее, и для ограничения кластеров клеток использовали покровное стекло, предварительно покрытое PreSens запатентованным датчиком кислорода (эквивалентным сенсорной фольге SF-RPSu4).Затем измеряли локальное напряжение кислорода вблизи клеток в течение 1 ч с 5-минутными интервалами, помещая блок детектора под 12-луночный планшет, обращенный к датчику. Калибровку Visisens проводили, подвергая фольгу сенсора SF-RPSu4 воздействию окружающего воздуха (21% кислорода) или насыщающего раствора Na ₂ SO ₃ в течение 10 мин (0% кислорода). К сожалению, такая установка не позволяла непосредственно визуализировать клетки под микроскопом, поскольку фольга была непрозрачной. И наоборот, было невозможно вырастить и перенести клетки на сенсорную фольгу, так что уровни кислорода можно было контролировать с помощью специальной камеры снизу, одновременно наблюдая за клетками сверху.

Измерение OCR и ECAR.

OCR (скорость потребления кислорода) и ECAR (скорость внеклеточного закисления) измеряли с помощью анализатора внеклеточного потока Seahorse Bioscience XF24 (Seahorse Bioscience, Северная Биллерика, Массачусетс) в соответствии с протоколом производителя. Клетки высевали в нормальную среду для выращивания за 24 ч до измерения при плотности 5 × 10 ⁴ клеток / лунку. Анализ проводили в минимальной базальной среде XF (Seahorse Bioscience) с добавлением 25 мМ глюкозы, 1 мМ пирувата натрия, 4 мМ глутамина, 10% FBS при pH 7.4. Перед измерением клетки предварительно инкубировали в этой среде в течение 1 ч при 37 ° C в увлажненной атмосфере без CO ₂. Олигомицин D (0,5 мкМ), FCCP (1 мкМ), ротенон (0,5 мкМ), антимицин A (0,5 мкМ) использовали для оценки дыхательной способности митохондрий и гликолитической способности. Данные были нормализованы по количеству клеток в каждой лунке и представлены как среднее значение для пяти различных лунок в двух независимых экспериментах.

Обнаружение ROS in situ с помощью CellROX Green

Для анализа окислительного стресса клетки инкубировали с указанными препаратами в течение 2 часов перед добавлением в среду реагента CellROX Green (Molecular Probes, ThermoFisher) в конечной концентрации 5 мкМ в течение 30 минут. мин при 37 ° C.Затем клетки трижды промывали PBS и помещали в камеру на 2 часа. Наконец, клетки фиксировали в течение 20 минут в 4% параформальдегиде и дважды промывали PBS. Затем измеряли флуоресценцию CellROX Green (Пример 488 / Em. 520) с помощью конфокальной микроскопии с идентичными настройками (Zeiss LSM 780 NLO, Zeiss, Германия). Эксперименты проводили в трех повторностях.

Обнаружение перекиси водорода с помощью флуоресцентного биосенсора HyPer-3

Для мониторинга концентрации перекиси водорода в цитозоле и оценки внутриклеточных изменений pH клетки MCF10A были совместно инфицированы лентивирусами HyPer-3 и HyPer-Red C199S ^38,39 .Белок HyPer-3 представляет собой круговой пермутированный желтый флуоресцентный белок (cpYFP), вставленный в регуляторный домен прокариотического H ₂ O ₂ -чувствительного белка, OxyR. Окисление цистеина 199 до сульфеновой кислоты с помощью H ₂ O ₂ приводит к структурной модификации OxyR-RD, которая изменяет спектр возбуждения флуоресценции YFP. Как сам белок, HyPer-3 особенно важен как индикатор окисления клеточного белка. Следует отметить, что HyPer-3 демонстрирует субмикромолярное сродство к перекиси водорода и нечувствителен к другим окислителям, таким как супероксид, окисленный глутатион, оксид азота и пероксинитрит.HyPer-3 не вызывает искусственного образования АФК при световой экспозиции и может использоваться для обнаружения быстрых изменений концентрации H ₂ O ₂ при различных физиологических и патологических состояниях. Однако HyPer-3 остается чувствительным к изменению pH. Таким образом, HyPer-Red-C199S, красная версия зонда HyPer-3 с дополнительной мутацией C199, которая делает зонд нечувствительным к H ₂ O ₂, но все еще чувствительным к изменениям pH, экспрессируется совместно с HyPer-3. .Получение изображений в реальном времени выполняли при 37 ° C и в 5% CO ₂ с помощью Zeiss LSM 780 (объектив 10X). Для оценки концентраций H ₂ O ₂ в целлюлозе были проведены два измерения флуоресценции при 525/30 нм, возбуждение было установлено либо на 488 нм, либо на 405 нм. Затем оценивали окисление HyPer-3, вычисляя соотношение 488/405, показывающее внутриклеточную концентрацию H ₂ O ₂. Для оценки изменений pH детектирование флуоресценции датчика HyPer-Red-C199S проводили в одном канале 647/75 нм с возбуждением на 560/40 нм.Анализ изображений был выполнен с помощью ImageJ. Для визуализации HyPer-3 изображения сначала обрабатывались для устранения фона, прежде чем было вычислено соотношение 488/405. Полученные изображения отображались в псевдоцветах. Отношение HyPer-3 и интенсивность флуоресценции HyPer-Red C199S были количественно определены и представлены по оси X с использованием плагина ImageJ «профиль графика».

Количественная оценка и статистический анализ

Статистические данные экспериментов можно найти в подписях к рисункам.Данные обычно представлены как среднее ± стандартное отклонение. Статистическая значимость определялась с использованием двустороннего критерия Стьюдента t ( n = 3; повторение 3 раза) со следующими условными обозначениями: * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001.

Инженер, разрабатывающий нестандартные решения для проблем COVID-19

Синь Нин, доцент аэрокосмической техники, получил грант на разработку датчика симптомов и складной полевой госпиталь — аналогичный тому, что был построен в Нью-Йорке в апреле 2020 года — для помощи в борьбе с COVID-19.ИЗОБРАЖЕНИЕ: ISTOCK / @ ALEXPOTEMKIN

Синь Нин, доцент кафедры аэрокосмической техники, получил грант Национального научного фонда на перевод складных космических инструментов в медицинское оборудование на Земле.

13.08.2020

Эшли Дж. Веннерс Херрон

УНИВЕРСИТЕТСКИЙ ПАРК, Пенсильвания — Синь Нин, доцент аэрокосмической техники, специализируется на разработке материалов для использования в космосе. Теперь он получил грант Национального научного фонда (NSF) на применение своего исследования немного ближе к дому, с растягивающимся датчиком и складным полевым госпиталем, которые могут помочь в пандемии COVID-19.

«Два года назад у меня возникла идея расширить камеру, которую можно было бы развернуть на Международной космической станции с возможностью наблюдения за здоровьем космонавтов», — сказал Нин. «Когда COVID-19 начал распространяться, я подумал, что эта идея может быть полезна на Земле».

Двухлетний грант в размере 265 000 долларов США является частью программы «Гранты EArly-concept для исследовательских исследований» (EAGER), которая финансирует ранние стадии исследований с преобразующим потенциалом.

Первым шагом в проекте Нин является разработка растягиваемого датчика, который подходит для груди и живота пациента.

«На самом деле это будет сеть датчиков, которые могут перемещаться вместе с пациентом и контролировать дыхание, температуру и кашель — три самых важных жизненных показателя, которые необходимо знать, когда дело касается этого вируса», — сказал Нин. «Довольно сложно измерить дыхание и кашель с помощью носимого датчика, потому что они по своей природе заставляют нас много двигаться. Благодаря тому, что несколько датчиков подключены к одной сети, показатели жизнедеятельности легче контролировать ».

Ning также планирует сделать датчик складным.Сделав датчик складным, его можно сжать в небольшую упаковку для хранения и транспортировки.

Носимый датчик подключается к антенне, что устраняет необходимость в проводах или батареях.

«Это похоже на технологию, которая позволяет вам покупать кофе, сканируя свой телефон в кассовом аппарате, но мы модифицируем ее, чтобы улучшить дальность передачи, чтобы обеспечить большую гибкость», — сказал Нин.

Эта гибкость будет особенно полезна для второй части проекта Нина: складной полевой госпиталь.

«Во время этой пандемии огромное количество пациентов привело к созданию полевых госпиталей по всей Азии, Европе — даже в Центральном парке в Нью-Йорке», — сказал Нинг.

Полевые госпитали помогают уменьшить давление пациентов и их переполнение, особенно перед лицом очень заразной болезни. Специалисты здравоохранения могут сортировать пациентов в полевом госпитале, зарезервировав установленные больничные ресурсы для наиболее серьезных случаев.

По словам Нина, проблема в том, что для строительства и эксплуатации полевых госпиталей требуются значительные ресурсы.Его решение — это простой в сборке блок, который может вместить от одного до двух пациентов и складывается в контейнер размером с большой чемодан.

«Мы используем концепции оригами, чтобы разработать это», — сказал Нин. «Оригами — это в основном модульная сборка, которую можно повторять и масштабировать. Когда у нас будет отделение на одного-двух пациентов, мы сможем расширить полевой госпиталь ».

Каждый блок будет иметь антенну, которая передает энергию на датчики, которые носят пациенты, а также принимает информацию о жизненно важных функциях.

Этот проект включает образовательный план по вовлечению студентов в исследование под названием «Мы. Мы заботимся.» «Мы» олицетворяет лозунг штата Пенсильвания и дух сообщества, которое вводит новшества, решает проблемы и стремится к совершенству, — сказал Нин. «We Care» отражает цель этого образовательного плана: привить студентам страсть к инженерным инновациям, чтобы помочь людям.

«Проекты, финансируемые через EAGER, считаются высокорисковыми, но, если они работают, они приносят большую прибыль», — сказал Нин.